【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

1.產(chǎn)品名稱：兔肌源性干細(xì)胞操作步驟

2.組織來源：肌肉組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

兔肌源性干細(xì)胞分離自肌肉組織；肌源性干細(xì)胞（MDSCs）屬于成體多能干細(xì)胞，具有多細(xì)胞系分化和自我更新能力。通過誘導(dǎo)刺激，MDSCs可以分化為脂肪、骨骼、軟骨、平滑肌和神經(jīng)細(xì)胞等多種細(xì)胞和組織類型；作為基因治療和組織工程的供體細(xì)胞，已成為治療心肌梗死、Duchenne氏肌營養(yǎng)不良等疾病的研究熱點(diǎn)；近年來，肌源性干細(xì)胞在治療尿失禁等方面的應(yīng)用逐步得到重視。需注意的是，肌源性干細(xì)胞主要存在于骨骼肌組織中，只是成熟組織的很少部分細(xì)胞；平時處于靜止?fàn)顟B(tài)，在細(xì)胞應(yīng)激和組織缺失時才會激活；并且隨著年齡的增加，所含細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，而目前臨床疾病的治療主要是針對成體進(jìn)行。肌源性干細(xì)胞的體外擴(kuò)增對細(xì)胞移植和干細(xì)胞介導(dǎo)的基因治療至關(guān)重要。對肌源性干細(xì)胞的擴(kuò)增研究發(fā)現(xiàn)，EGF、FGF-2和SCF可以通過減數(shù)分裂或促使不分裂細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂周期，從而刺激細(xì)胞增生。更重要的是，細(xì)胞因子誘導(dǎo)的體外擴(kuò)增可以通過自我更新不刺激細(xì)胞分化，從而保持干細(xì)胞表型。

本公司的兔肌源性干細(xì)胞采用膠原酶-*-*聯(lián)合消化法結(jié)合密度梯度離心、差速貼壁法，zui后通過肌源性干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)CD34、Desmin、CD45免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

5.培養(yǎng)基信息：

DMEM[H]、FBS、HS、Chicken Embryo Extract(CEE)、Penicillin、Streptomycin等

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
優(yōu)勢：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時限至一個月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價，超過一個月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系，優(yōu)秀的科研隊(duì)伍，*的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
(Cyclin Dependent Kinase 6)
Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗人IgG CDK7/Cyclin H/MAT1
PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgG CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8)
PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗人IgG Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C)
APC標(biāo)記的小鼠抗人IgG CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 )
Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgG Cecropin
Cy5標(biāo)記的小鼠抗人IgG HER2 receptor(erbB-2 isoform 2)
Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgG C-erbB-4/HER4/erbB-4 (epidermal growth factor receptor4)
Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgG CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator)
羅丹明標(biāo)記的小鼠抗人IgM CG6856-PA peptide
*標(biāo)記的小鼠抗人IgM CGA(Chromogranin A)
辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗人IgM CGB(Chromogranin B)
FITC標(biāo)記的小鼠抗人IgM ChRM1(muscarinic acetylcholine receptor)
Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgM ChRM3 peptide
Cy5標(biāo)記的小鼠抗人IgM CK18(Cytokeratin 18)
Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgM CK18 peptide
PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgM CK18(Cytokeratin 18)
PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗人IgM CK14/17/42/10 peptide
APC標(biāo)記的小鼠抗人IgM CK16(Cytokeratin 16)
Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗人IgM CK17(Cytokeratin 17)
Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗人IgM CK1/8/19 (Cytokeratin1/8/19; Keratin 1/8/19)peptide
Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗人IgM CK2(casein kinase 2)
Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗人IgM CK5(Cytokeratin 5)
PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgM CK7(Cytokeratin 7)human
PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgM CK8(Cytokeratin 8)
堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的小鼠抗人IgM CKIP-1(casein kinase 2 interaction protein 1)
膠體金標(biāo)記的小鼠抗人IgM CLCA4(Calcium-activated chloride channel 4)
Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgM C-Mer/MERTK (proto-oncogene tyrosine kinase)
PE標(biāo)記的小鼠抗人IgM c-Myc tag
羅丹明標(biāo)記的小鼠抗羊IgG AU5 tag
Human Collagenase Type II ELISA Kit  人膠原酶II   48T
Human Collagenase I ELISA Kit  人膠原酶I   48T
P-PKC(Human phospho Protein Kinase C) ELISA Kit  人磷酸化蛋白激酶C   48T
pERK(Human phospho-extracellular signal-regulated kinase) ELISA Kit  人磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶   48T
AChE(Human Acetylcholinesterase) ELISA Kit  人乙酰*酯酶   48T
GOD(Human glucose oxidase) ELISA Kit  人葡萄糖氧化酶   48T
TH(Human tyrosine hydroxylase) ELISA Kit  人*羥化酶   48T
DDC(Human dopamine decarboxylase) ELISA Kit  人多巴胺脫羧酶   48T
NNE(Human non-neuronal enolase) ELISA Kit  人非神經(jīng)元性烯醇化酶   48T
DBH(Human dopamine- Beta-hydroxylase) ELISA Kit  人多巴胺-β羥化酶   48T
CHAc(Human choline acetylase) ELISA Kit  人*乙酰化酶   48T
ICD(Human isocitrate dehydrogenase) ELISA Kit  人異檸檬酸脫氫酶   48T
Try- II (Human Trypsinogen-2) ELISA Kit  人*原Ⅱ   48T
ADA(Human adenosine deaminase) ELISA Kit  人腺苷脫氨酶   48T
HAase(Human Hyaluronidase) ELISA Kit  人透明質(zhì)酸酶   48T
AST(Human Aspartate aminotransferase) ELISA Kit  人天*氨基轉(zhuǎn)移酶   48T
ACP(Human Acid Phosphatase) ELISA Kit  人酸性磷酸酶   48T
GPI(Human glucose-6-phosphate isomerase) ELISA Kit  人葡萄糖6磷酸異構(gòu)酶   48T
PGM(Human Phosphoglucomutase) ELISA Kit  人磷酸葡萄糖變位酶   48T