【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

1.產(chǎn)品名稱：兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞操作步驟

2.組織來源：脂肪組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時可迅速分解成甘油和脂肪酸，液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內(nèi)皮功能、纖溶活動及炎癥反應(yīng)，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官而成為一個極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)。脂肪組織中也存在一些干細(xì)胞群，具有自我更新能力和多向分化潛能，被稱為脂肪組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞，簡稱脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比，在來源、細(xì)胞群特點以及分化潛能等多方面極為相似。但是，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞更易獲得足夠數(shù)量的細(xì)胞，且獲取過程中對機(jī)體損傷更小，是更為理想的自體干細(xì)胞源。脂肪組織分離得到脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞以梭形為主要形態(tài)，BrdU可標(biāo)記其細(xì)胞核。

本公司的兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)CD90/CD44、CD34/CD45免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

5.培養(yǎng)基信息：

DMEM-F12、FBS、間充質(zhì)干細(xì)胞生長添加劑、Glutamine、Penicillin、Streptomycin等

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
優(yōu)勢：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時限至一個月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價，超過一個月重發(fā)全額收費。
5、經(jīng)濟(jì)、實惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實驗體系，優(yōu)秀的科研隊伍，*的實驗設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實驗結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。

Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗小鼠IgM ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide)
堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗小鼠IgM Kir6.2 peptide
堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的羊抗小鼠IgM AVPR2(arginine vasopressin receptor 2)
辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗豬IgG Aurora B
膠體金標(biāo)記的兔抗豬IgG Nociceptin
PE標(biāo)記的兔抗豬IgG B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1)
PE-CY5標(biāo)記的兔抗豬IgG Nociceptin receptor
PE-Cy7標(biāo)記的兔抗豬IgG Nogo-A
*標(biāo)記的兔抗豬IgG Nogo R
*標(biāo)記的兔抗大鼠IgG Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter)
辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗兔IgM Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter)
PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgG phospho-BAD(pSer128)
Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗兔IgG Bak(BCL2 homologous antagonist/killer)
Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗兔IgG NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1)
Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgG NOS-2 (iNOS) Nitric Oxide Synthase,Inducible
PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG Batroxobin
Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG NOS-3 (eNOS) endotheli cell NOS
Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗兔IgG NPY ( Neuropeptide Y)
Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗兔IgG NR2B (Glutamate receptor)
Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗小鼠IgG NT-3
Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗小鼠IgG NT-4,NT-5
人N端中段骨鈣素   48T
LRP-6(Human low-density lipoprotein-receptor-related protein) ELISA Kit  人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6   48T
VLDLR(Human very low density lipoprotein receptor) ELISA Kit  人極低密度脂蛋白受體   48T
LDLR(Human very low density lipoprotein receptor) ELISA Kit  人低密度脂蛋白受體   48T
HDL(Human High density lipoprotein) ELISA Kit  人高密度脂蛋白   48T
Alpha-GST(Human Alpha-glutathione S-transferases) ELISA Kit  人α*S轉(zhuǎn)移酶   48T
GSH-Px kit(human)  人*過氧化物酶elisa試劑盒   96T
Hcy(Human Homocysteic acid) ELISA Kit  人同型半*   48T
FFA(Human free fatty acids) ELISA Kit  人游離脂肪酸   48T
ON(Human osteonectin) ELISA Kit  人骨粘連蛋白   48T
FA(Human Folic acid) ELISA Kit  人*   96T
ET(Human endotoxin) ELISA Kit  人內(nèi)毒素   48T
PPAR- Gamma(Human Peroxisome Proliferator-activated receptor Gamma) ELISA Kit  人過氧化物酶體增殖因子活化受體γ   48T
CsA(Human Cyclosporine A) ELISA Kit  人*A   48T
GFAP(Human glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit  人神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白   48T
15-LO/LOX(Human 15-lipoxygenase) ELISA Kit  人15脂加氧酶   48T
CETP(Human glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit  人*酯轉(zhuǎn)移蛋白   48T
LTC4(Human Leukotriene C4) ELISA Kit  人白三烯C4   48T
Cyt-C(Human Cytochrome-C) ELISA Kit  人*   48T
LPL(Human lipoprotein lipase) ELISA Kit  人脂蛋白脂酶   48T
GP-II(Human Glycogen phosphorylase II) ELISA Kit  人糖原磷酸化酶同工酶II   48T
GP-MM(Human Glycogen phosphorylase MM) ELISA Kit  人糖原磷酸化酶同工酶MM   48T
GP-BB(Human Glycogen phosphorylase BB) ELISA Kit  人糖原磷酸化酶同工酶BB   48T
Lp- Alpha(Human lipoprotein Alpha) ELISA Kit  人脂蛋白α   48T
Cr(Human Crosslaps) ELISA Kit  人骨膠原交聯(lián)   48T
C I CP(Human cross-linked C-opeptides of Type I collagen) ELISA Kit  人Ⅰ型前膠原C末端