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NIH/3T3（小鼠胚胎細(xì)胞）操作步驟

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更新時間：2017-07-31 14:46:35瀏覽次數(shù)：216次

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動物細(xì)胞

人源免疫細(xì)胞及干細(xì)胞

細(xì)胞系

原代細(xì)胞

轉(zhuǎn)化細(xì)胞

人正常組織來源細(xì)胞

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上海邦景實業(yè)有限公司

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產(chǎn)品簡介

NIH/3T3（小鼠胚胎細(xì)胞）操作步驟售后：收到細(xì)胞后7天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r，應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報告并及時傳真致銷售人員，我們將盡快為您解決。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱:NIH/3T3（小鼠胚胎細(xì)胞）操作步驟

細(xì)胞形態(tài)

成纖維細(xì)胞樣

背景描述

NIH/3T3細(xì)胞是從NIH Swiss小鼠胚胎培養(yǎng)物中建立的高度接觸性抑制的連續(xù)傳代細(xì)胞株。為了培育在形態(tài)學(xué)特征上更適合于進(jìn)行轉(zhuǎn)化分析的亞株，建立的NIH/3T3細(xì)胞株又進(jìn)行了5輪以上亞克隆。NIH/3T3細(xì)胞對肉瘤病毒的轉(zhuǎn)化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感，對DNA轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)染研究十分有用；NIH/3T3細(xì)胞鼠痘病毒陰性。

生長培養(yǎng)基

DMEM高糖(貨號:PM150210)＋10% CS＋1% P/S(貨號:PB180120)

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

細(xì)胞名稱	NIH/3T3（小鼠胚胎細(xì)胞）操作步驟
規(guī)格	5×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
價格	來電可享受優(yōu)惠

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
優(yōu)勢：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時限至一個月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價，超過一個月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實驗體系，優(yōu)秀的科研隊伍，*的實驗設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實驗結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
形成相關(guān)凋亡蛋白7抗體 TSARG7
端粒酶相關(guān)蛋白1抗體 TEP1
*轉(zhuǎn)胺酶3抗體 TGM3
環(huán)指蛋白92抗體 RNF92
環(huán)指蛋白調(diào)節(jié)蛋白激酶C蛋白抗體 TRIM41
TRIM50蛋白抗體 TRIM50
環(huán)指蛋白88抗體 RNF88
鋅指蛋白抑制NFκB蛋白抗體 TRIAD3
環(huán)指蛋白98抗體 RNF98
環(huán)指蛋白16抗體 RNF16
環(huán)指蛋白105抗體 RNF105
環(huán)指蛋白125抗體 RNF125
*(*II)重鏈抗體 Thrombin heavy chain
轉(zhuǎn)移生長因子β受體3抗體（TGF-βRⅢ，TGFβRⅢ） TGF Beta R3
辣椒素受體抗體 TRPV1
腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗體 TNFAIP1
*α1抗體 Thymosin Alpha-1
金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體 TIMP-4
金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體（N端） TIMP-1(NT)
金屬蛋白酶組織抑制因子-2抗體 TIMP-2
甲狀腺素T4抗體 T4/L-Thyroxine
TIGAR蛋白抗體 TIGAR
CD90抗體 CD90 / Thy1
線粒體DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅰ抗體 *MT
突觸融合蛋白結(jié)合蛋白5抗體 Tomosyn/STXBP5
UNC80蛋白抗體 UNC80
四分子交聯(lián)體4抗體（四旋蛋白） TSPAN4
轉(zhuǎn)錄因子Tbx18抗體 TBX18
干燥綜合征相關(guān)蛋白2抗體 TROVE-2
甲狀腺激素受體相互作用蛋白4抗體 TRIP4
β-taxilin蛋白抗體 TXLNB
轉(zhuǎn)錄因子E2F二聚體蛋白2抗體 TFDP2
TIP30蛋白抗體 TIP30
酪蛋白硫酸轉(zhuǎn)移酶1抗體 TPST1
Toll樣受體5抗體 TLR5
human-VEGF-D 大鼠血管內(nèi)皮生長因子D   48T
VEGF-R1 大鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1   48T
VEGF-R2 大鼠血管內(nèi)皮生長因子受體2   48T
UPAR 大鼠*樣纖溶酶原活化物受體   48T
TH1/TH2 大鼠細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子   48T
HLA-G 大鼠白細(xì)胞抗原G   48T
CTGF 大鼠結(jié)締組織生長因子   48T
MIP-1 Alpha 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α   48T
MIP-1 Gamma 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1γ   48T
MIP-1 Beta 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1β   48T
MIP-2 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2   48T
MIP-3 Alpha 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-3α   48T
MIP-3 Beta 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-3β   48T
MIP-4 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-4   48T
MIP-5 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-5   48T
MCP-1 大鼠巨噬細(xì)胞趨化蛋白-1   48T
Ret MMP-9 大鼠血清金屬基質(zhì)蛋白酶-9   48T
RAES 大鼠趨化因子   48T
E2(Ret) 大鼠雌二醇   96T
G-CSF 大鼠粒細(xì)胞-集落刺激因子   48T
GM-CSF 大鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子   48T
M-CSF 大鼠巨噬細(xì)胞-集落刺激因子   48T
LIF 大鼠白血病抑制因子   48T
IGF-1 大鼠胰島素樣生長因子-1   48T
IGF- II 大鼠胰島素樣生長因子-Ⅱ   48T
ICAM- I 大鼠細(xì)胞間粘附因子-Ⅰ   48T
VCAM-1 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞間粘附因子-1