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驅動蛋白重鏈ATP酶活性檢測方案大放送!

時間:2021/5/12閱讀:327
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驅動蛋白是1985年從魷魚的軸質(axonplasm)中分離的一種發動機蛋白。能利用ATP水解所釋放的能量驅動自身及所攜帶的貨物分子沿微管運動的一類馬達蛋白,與細胞內物質運輸有關。

Kinesin.png

 

結構及功能:

 

驅動蛋白是一條長80nm的桿狀結構,頭部一端有兩個成球狀的馬達結構域,另一端是重鏈((kinesin heavy chainKHC)和輕鏈(kinesin light chainKLC)組成的扇形尾端,中間是重鏈組成的桿狀區。球狀的頭部具有ATP結合部位和微管結合部位。大多數驅動蛋白趨向于微管的正端,在大多數細胞中,這要求將貨物(例如蛋白質和膜成分)從細胞中心向外圍運輸。這種運輸方式稱為順行運輸。

Kinesin-1.png

 

由于驅動蛋白在在細胞諸多物質運輸過程中起著至關重要的作用,對不同狀態下驅動蛋白活性檢測也有了需求,驅動蛋白通過利用ATP水解的能量沿著微管(MT)上面移動而起作用。一旦驅動蛋白結合到它預定的MT軌道上,ATPase的作用效果通常會提高幾百到幾千倍。MT激活的驅動蛋白ATPase是其運動功能的主要參數,是監測和研究各種實驗條件下驅動蛋白活性的有力方法。

 

Cytoskeleton的Kinesin ELIPA 驅動蛋白ATP酶檢測(酶聯無機磷酸鹽測定)試劑盒,主要基于在無機磷酸鹽(Pi)的存在時,在苯胺中嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)將2-氨基-6-巰基-7-甲基嘌呤核糖核苷(MESG)催化為2-氨基-6-巰基-7-甲基嘌呤時在330-360 nm處發生的吸光度變化來反映驅動蛋白活性。一分子無機磷酸鹽將在不可逆的反應中生成一分子2-氨基-6-巰基-7-甲基嘌呤。用途如下:

1.動力學測量微管激活的驅動蛋白ATPase的活性

2.驅動蛋白抑制劑的篩選現

3.驅動蛋白抑制劑IC50s的測定

 

檢測結果如下:

Kinesin-2.png

微管激活驅動蛋白重鏈ATP酶活性檢測結果:檢測了一些驅動蛋白ATP酶活性。ATP水解的Vmax范圍從驅動蛋白HC10,000 nmol ATP / min / mg到染色質激酶的470 nmol ATP / min / mg之間。

 

文章來源:艾美捷科技

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