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翻譯后修飾(PTMs)是對蛋白質的動態、嚴格調節的改變,它通過調節蛋白質的結構、空間定位和互作、從而控制其功能,PTMs主要包括磷酸化、甲基化、乙酰化(Ac)、泛素化(Ub)、SUMO1或2/3等方式,但還有許多其它的,PTMs的錯誤調節與癌癥、心力衰竭、神經和代謝性疾病等的進展有關。
蛋白質發生PTM后,會顯著改變蛋白的理化及構象,從而直接改變蛋白的結合能力與功能。因此,即使蛋白的表達水平沒有改變,但如果翻譯后修飾的狀態發生改變,蛋白的功能也會顯著變化。zui終,PTM實現了蛋白質功能的指數級擴增。
PTM對蛋白功能影響是多樣性的,表現在以下三個方面:(1)同一蛋白質,即使只發生一種類型的修飾,也會賦予其多種功能;(2)同一個蛋白的同一種翻譯后修飾,如果發生在不同的氨基酸上,其功能也不同;(3)同一蛋白還可能具有不同的修飾,其功能和參與的生物過程就更為復雜。下圖以intermediate filament protein(IF蛋白)為例:
NatureReviews Molecular Cell Biology 15, 163–177 (2014)
蛋白修飾及功能的多樣性是維持機體復雜精準調控的基礎,但同時也給研究PTM的科研人員的研究造成了很多的困擾,為什么蛋白質翻譯后修飾的鑒定難度要遠遠高于未發生修飾的蛋白質的鑒定了,主要有以下幾點:
1.發生翻譯后修飾的蛋白質樣本量相對較少
2.發生修飾時形成的共價鍵非常不穩定,且處于動態變化中
3.修飾與未修飾的蛋白及多種修飾形式的蛋白常混合存在
Signal-Seeker™ kit用于分析各種蛋白翻譯后修飾的情況:如賴氨酸乙酰化、泛素化、SUMO化、磷酸化等修飾的鑒定及各種修飾的上調下調表達。使用親和磁珠從任何給定的細胞或組織裂解液中提取并富集修飾蛋白。然后通過標準的Western blot程序分析濃縮蛋白群,zui終用戶使用自身的抗體檢測所需的修飾蛋白。
Signal-Seeker™ kit應用實例:
Signal-Seeker™試劑盒研究Rac1蛋白的單泛素化和多元泛素化
文章來源:艾美捷科技
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