近年來，AAT熒光探針領域陸續出現了很多優質的鈣離子探針，這些為實現高通量監測鈣濃度，篩選GPCR和鈣離子通道藥物篩選提供了有力的工具。下面一起來看看幾個關于鈣離子探針的常見問題吧~希望能給大家帶來一些幫助！

一、內質網（ER）鈣離子濃度檢測熒光探針

內質網是一個復雜的、高度動態的細胞內三維膜系統，在大多數真核細胞中起著動態鈣庫的作用。內質網Ca2+緩沖液的特殊排列，以對Ca2+的低親和力為特征，與SERCA泵活性相結合，使內質網Ca2+（[Ca2+]L）保持恒定∼0.1–0.8 mM（細胞鈣38:303–310，2005），從而產生針對細胞溶膠的陡峭電化學梯度。內質網Ca2+通道的激活導致Ca2+釋放，這有助于[Ca2+]i升高，而SERCA依賴的Ca2+攝取有助于終止胞漿Ca2+信號。

此外，連續的管腔空間可作為游離Ca2+離子（“Ca2+通道”）的行進路線，從而繞過胞漿Ca2+緩沖液，防止線粒體Ca2+攝取或Ca2+在質膜上丟失。

此外，[Ca2+]L的變化調節內質網駐留的伴侶，負責翻譯后的蛋白質處理。因此，[Ca2+]L整合了各種信號事件，并在與ER-Ca2+釋放/攝取相關的快速信號和主要依賴于蛋白質合成調節的持久適應性反應之間建立了聯系。

那么，關于內質網鈣離子檢測，Cal-520N（Cat# 21146）, Calbryte 520L（Cat# 20640）, Fluo-5N（Cat# 20566）和Mag-fluo4（Cat# 20401)都是可以的。

二、檢測細胞中鈣離子時加入丙磺舒（probenecid）的作用是什么？文獻報導丙磺舒（probenecid）可能會干擾鈣離子通道，比如干擾環核苷酸門控通道，有沒有可以不用丙磺舒的鈣離子探針？

丙磺舒（probenecid），是一種陽離子轉運體抑制劑，用來降低探針進入胞內后被排除的幾率，以提高胞內信號。常見的Fluo-3 、fluo-4、 Fluo-8都需要加丙磺舒，否則信號會很低。可以選擇Calbryte系列，該系列無需丙磺舒（probenecid）仍會有很好的信號。

三、熒光探針的AM、鹽形式、Dextran葡聚糖形式有什么區別？

AM酯形式：AM酯形式是一種可以透過細胞膜進入細胞的，不需要其他輔助工具；

鹽形式：鹽形式的Fluo-8不能自行穿過細胞膜，需要輔助進入細胞，如微量注射等；

Dextran葡聚糖形式：若檢測孵育時間久容易發生區室化，比如鉆進了內質網等亞器官內，Dextranzui大的優勢就是降低了區室化作用，但是需要顯微注射或其他方式才能進入細胞內。

四、樣本中鈣離子定量檢測試劑盒

人體血液里鈣離子的濃度大約在19 -10.5 mg/dL范圍內，血液里鈣離子濃度過低或者過高可引起低鈣血癥和高鈣血癥。Amplite 熒光法鈣離子定量試劑盒（Cat#36360）可用于定量體液的鈣離子濃度，可使用96孔或者384孔板經酶標儀讀取數值， 不需進行樣本分離直接檢測，30min可完成，zui低檢測到0.03mM的鈣離子。

五、用于植物細胞（擬南芥原生質體）的鈣離子探針

常用的 Fluo-4 AM, Fluo-8 AM 以及 Calbryte 520 AM, 都適用于植物細胞，Fluo-4zui常用，若要獲得更好的信噪比，其升級版本 Calbryte 520 AM更合適。

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