Phalloidin是蘑菇鵝膏菌中的一種七個氨基酸的肽毒素,它與肌動蛋白(F-actin)的聚合形式特異性結合并具有高親和力(kd20nm)。Phalloidin將肌動蛋白聚合的臨界濃度降低到1?g/ml以下,從而起到聚合促進劑的作用。Phalloidin已經(jīng)用一種專有的紅色熒光染料標記,它可以用來染色組織培養(yǎng)細胞和組織切片中的肌動蛋白絲(1,見圖1)?以及無細胞制劑。活性染色? 555yin莖環(huán)素標記的肌動蛋白絲保留了未標記肌動蛋白的許多功能特性,包括它們與肌球蛋白相互作用的能力。肌動蛋白染色? 555 phalloidin以紅色固體形式提供。
3T3細胞Rho活化,細胞核用Dapi(藍色)染色,F(xiàn)-肌動蛋白用Acti染色? 555(紅色F-肌動蛋白,Cat.#PHDH1-A)。
Acti染色的吸光度和熒光掃描? 將標記的鬼筆苷稀釋到甲醇中,分別在300-750和560-750nm之間掃描其吸光度和激發(fā)光譜。吸收峰在560nm處,熒光峰在575nm處。
Acti-stain 555鬼筆環(huán)肽用途:
1.固定組織切片和組織培養(yǎng)細胞制備中肌動蛋白絲的熒光染色。注:與許多肌動蛋白抗體不同,Acti染色? 555 phalloidin僅與F-肌動蛋白結合,導致低背景熒光。此外,肌動蛋白染色并沒有明顯的不同物種。
2.穩(wěn)定熒光肌動蛋白絲的體外制備。
肌動蛋白染色對確定活細胞和固定細胞骨架的結構和功能非常有用。肌動蛋白細胞骨架在活細胞中是一個非常動態(tài)和不穩(wěn)定的結構,但它可以在探測或染色肌動蛋白結構之前用多聚甲醛固定。