為了找到合適的條件,PolyMag CRISPR須以1µL/µg DNA的比例進行測試。為了DNA數量,建議96-well,每well 0.0625/0125/0.25µg,24-well每孔0.25/0.5/1µg以及在6孔中每孔1/2/4µg。
這些條件可能需要根據你的細胞、DNA、RNA等進行進一步的優化。
艾美捷OZ Biosciences PolyMag CRISPR試劑盒優化協議:
建議您優化轉染條件,以充分利用磁轉染?. 可以優化幾個參數:
•使用的核酸劑量
•PolyMag CRISPR與核酸的比例
•細胞密度
•培養時間
1.首先優化PolyMag CRISPR/DNA的比例。為此,使用固定數量的DNA。變化PolyMag CRISPR的量為0.25至5m升/mg的DNA。PolyMag CRISPR/DNA的比例可以通過將所使用的試劑的體積加倍或相乘來改變。試劑可以是在去離子水中預先稀釋。
2.此后,以固定比例的PolyMag CRISPR/DNA改變核酸劑量之前進行了優化。為此,您可以對預成型的磁矢量復合體。
3.也可以研究每個質粒的化學計量:改變每個質粒的比例整個混合物中的DNA。
4.在確定了正確數量的PolyMag CRISPR和核酸后,您可以通過優化復合體的細胞數量和孵育時間來實現這一過程形成和用于磁場應用。
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