神經末端探針是一系列已開發的熒光陽離子苯乙烯染料以跟蹤神經肌肉接頭或突觸處的突觸活動。這些染料通常在一端有一個親脂性的尾部（兩個碳鏈）在另一端具有親水性、帶陽離子電荷的頭基團。這些神經末梢探針最初被稱為FM®染料，可從Biotium獲得SynaptoGreen的商標名稱™ 和突觸紅™. 突觸綠色探針是具有單雙鍵的染料（n=1），而SynaptoRed探針是具有三個雙鍵（n＝3）。一種神經末梢染料被命名為突觸綠或SynaptoRed，后跟一個表示親脂性長度的碳數尾陽離子苯乙烯基染料被認為是通過對突觸小泡進行染色而發揮作用的依賴活動的時尚。在存在細胞或組織制劑的情況下，染料其中染料實際上是非熒光的水相之間的分配，和細胞表面膜的外小葉，其中染料插入親脂性末端進入膜并變得強烈熒光。在期間神經刺激后的內吞作用，染料被困在囊泡。因此，在洗掉細胞表面的染料后，熒光信號與新形成的囊泡的數量成比例。

另一方面，在胞吐、染料與神經遞質一起從囊泡中釋放，從而導致熒光信號的降低。因此，熒光的變化強度反映了胞吞/胞吐或突觸活動的量。這個內吞過程中熒光增加的速率，“開啟速率"和胞吐過程中的熒光減少，即“脫落率"，因染料而異。在里面一般來說，具有較長親脂性尾部和較多雙鍵的染料具有較高的對膜的親和力，從而具有較高的開啟速率和較低的關閉速率。一些苯乙烯基染料可以通過離子通道進入細胞。突觸綠C18具有長碳鏈，不能通過離子通道，已被用作區分染料吸收機制的對照。突觸綠色和突觸紅色是不可修復的。AM和HM染料是醛固定性神經末端染料。

當使用神經末梢染料時，研究人員經常遇到的一個問題是非特異性膜染色引起的背景熒光。盡管大多數背景熒光可以通過反復洗滌來去除，問題是對于具有較長尾部或更多雙鍵的染料仍然很重要，特別是當染料用于組織制劑時。Biotium提供各種背景用于神經末梢染料的還原劑。ADVASEP-7是一種磺化β-環糊精，有助于在洗滌過程中去除染料。SCAS淬火

無需重復wsh步驟的膜結合染料的熒光. 磺基羅丹明101是一種能猝滅背景的紅色熒光染料通過FRET從綠色神經末端染料發出熒光（5）。Biotium還提供神經終端染色套件，包括染料和背景還原劑。

艾美捷SynaptoGreen C4#70020圖例分析：

圖1：突觸綠C4的吸收和發射光譜在脂質體中。其他突觸綠色染料的光譜相似

圖2：突觸紅C2在脂質體。其他突觸紅染料的光譜相似

SynaptoGreen C4化驗方案：

以下是培養的神經末梢染色方案的一個例子蓋玻片上的神經元。神經末端染料也可用于標記內吞作用非神經元細胞類型中的囊泡。染色可以在4℃下進行C表示選擇性質膜的標記；室溫或37度C、 細胞內吞作用染色通常在10分鐘內發生。可以使用除Tyrode溶液以外的緩沖液習慣于添加鈉通道阻斷劑河-豚-毒素（TTX）是可選的，其目的是阻斷動作電位，防止突觸小泡在染色。可能需要確定特定應用的適合協議由用戶進行；參見參考文獻，了解腦切片染色方案的示例，以及其他細胞類型。

1.在50mM蒂羅爾中將神經末梢染料稀釋至最終濃度為4uM解決方案將蓋玻片與細胞一起放入此溶液中1分鐘室溫。使用足夠的溶液將細胞完-全浸沒。

2.將蓋玻片轉移到Tyrode+0.5μM河-豚-毒素（TTX，目錄號。00061）溶液在室溫下攪拌1分鐘。

3.在室溫下，用Tyrode+TTX清洗蓋玻片數次。

注：為了減少背景，可以使用1mM ADVASEP-7（目錄號70029）添加到洗滌溶液中。或者，SCAS（目錄號70037）可以是用于在不重復洗滌的情況下驟冷背景。培養蓋玻片在室溫下在Tyrode+TTX+0.5mM SCAS中保持4分鐘。

4.將蓋玻片安裝在Tyrode+TTX中并進行成像。注：對于SynaptoGreen染料，50μM磺基羅丹明101（目錄no.80101），以猝滅細胞外熒光。

注意：SynaptoGreen和SynaptoRed染料不可固定。AM和HM染料（見相關產品）是可固定醛的神經末梢染料。

參考文獻：

1. Vida, TA and Emr, SD. J. Cell Biol 128, 779(1995).

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