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人*(Thymosin)ELISA試劑盒說明書
閱讀:70 發(fā)布時間:2019-12-4人*(Thymosin)ELISA試劑盒的詳細資料:
英文名稱:People Thymosin (Thymosin) ELISA kit
貨號:KS12345
規(guī)格:96T/48T
使用范圍:僅限科研范圍內使用
各種種屬:人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛、羊…
標本齊全:血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液、關節(jié)液、胸腔yi液等…
保存條件:2-8℃
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人肌酸激酶腦型同工酶(CK-BB)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人肌酸激酶腦型同工酶(CK-BB)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
人*(Thymosin)ELISA試劑盒樣本處理及要求
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
人*(Thymosin)ELISA試劑盒需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑準備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
人*(Thymosin)ELISA試劑盒操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
人*(Thymosin)ELISA試劑盒注意事項
1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
人*(Thymosin)ELISA試劑盒洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。根據需要,重復此過程數次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
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