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Biolog方法用于環(huán)境微生物群落研究
閱讀：184 發(fā)布時間：2023-7-13Biolog方法美國的BIOLOG公司于1989年開發(fā)成功，最初就根據(jù)其中具體類型的代謝指紋來鑒定已分離純化的環(huán)境微生物物種，至今已經(jīng)能夠鑒定包括細菌、酵母菌和霉菌在內(nèi)的2000多種病原微生物和環(huán)境微生物。1991年，Garland和Mills開始將這種方法應(yīng)用于土壤微生物群落的研究，該項工作引起了許多微生物生態(tài)學研究者的廣泛關(guān)注。測定原理：Biolog研究環(huán)境微生物的載體是微孔板(micro plate)，每板包含96個孔，其中95個孔中加入了95種單一碳源和四唑染料，另外一個未加碳源的孔中加水為對照，環(huán)境微生物接種到微孔板上的孔中后，孔中的環(huán)境微生物就可能利用其中的碳源而發(fā)生氧化還原作用，而孔中一旦有電子轉(zhuǎn)移，這種四唑染料就會變?yōu)樽仙瑫r也表明這種碳源被接種到其中的環(huán)境微生物所利用。顏色的深淺可以反映環(huán)境微生物對碳源的利用程度。由于環(huán)境微生物對不同碳源的利用能力很大程度上取決于環(huán)境微生物的種類和固有性質(zhì)，因此在一塊微平板上同時測定環(huán)境微生物對不同單一碳源的利用能力(sole carbon source utilization，SCSU)，就可以鑒定純種環(huán)境微生物或比較分析不同的環(huán)境微生物群落。
Biolog方法用于環(huán)境微生物群落研究，具有以下特點：①靈敏度高，分辨力強，對SCSU的測定可以得到被測環(huán)境微生物群落的代謝特征指紋(metabolic finger print)，分辨環(huán)境微生物群落的微小變化；②無需分離培養(yǎng)純種環(huán)境微生物，可最大限度地保留環(huán)境微生物群落原有的代謝特征；③測定簡便，數(shù)據(jù)的讀取與記錄可以由計算機輔助完成，環(huán)境微生物對不同碳源代謝能力的測定在一塊微平板上一次完成，效率大大提高。
Biolog 系統(tǒng)主要包括Biolog微平板、微平板讀數(shù)器和一套微機系統(tǒng)，具體說明如下：
Biolog系統(tǒng)組成與說明：
Biolog微平板——共96孔，孔中含有營養(yǎng)液和四唑鹽染料TTC；其中1孔不含碳源，為對照孔，其他95孔含有不同單一碳源；
讀數(shù)器——測定一定波長下每個小孔內(nèi)的吸光度及變化；
微機系統(tǒng)——與讀數(shù)器相連，自動完成數(shù)據(jù)采集、傳輸、貯存與分析。
Biolog方法操作的主要流程：
步驟1，平板選擇：針對G+和G-細菌選擇不同平板（Biolog GP、Biolog GN），各孔內(nèi)碳源也可調(diào)控；
步驟2，樣品制備：將微生物從環(huán)境介質(zhì)中提取出來，控制到適宜濃度（濁度表示）；
步驟3，加樣：取一定體積菌液（一般150μL/孔），平行加入各孔；
步驟4，培育與讀數(shù)：恒溫培育，用微平板讀數(shù)器記錄各孔吸光度值變化。