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植物核DNA大量提取試劑盒操作步驟

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產(chǎn)品說明:

      改進(jìn)的經(jīng)典CTAB植物DNA抽提液內(nèi)(添加多種針對植物特點(diǎn)的多糖、多酚去除成份)迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶,lv仿抽提后通過離心清除多糖、多酚和蛋白,然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜, 再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟, 進(jìn)一步將多糖,多酚和細(xì)胞代謝物,蛋白等雜質(zhì)去除, zui后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

 

注意事項(xiàng):

◆   所有的離心步驟均在室溫完成,使用離心力可以達(dá)到10,000×g的高速離心機(jī)。

◆   開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到65℃?zhèn)溆谩?/p>

◆   需要自備β-巰基乙醇。

◆   Buffer P3 和HB buffer中含有刺激性化合物,操作時(shí)要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí),要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

◆   不同來源的植物組織材料中提取的DNA 的量會(huì)有差異,一般1g新鮮組織典型產(chǎn)量可達(dá)30-250μg。

◆   洗脫液EB不含有螯合劑EDTA, 不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫,但應(yīng)該確保PH大于7.5, PH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在-20℃。DNA如果需要長期保存,可以用TE緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA,PH 8.0),但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng),使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。

試劑盒特點(diǎn):

◆   離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

◆   不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。

◆   快速,簡捷,單個(gè)樣品操作一般可在1小時(shí)內(nèi)完成。

◆   數(shù)種去多糖、多酚成份和多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7~1.9,長度可達(dá)30Kb-50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。

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