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375次Grace昆蟲培養基(Grace's Insect Medium)初設計為支持澳大利亞白星橙天蠶蛾 (Antherea eucalypti) 細胞 的生長,是對Wyatt培養基的改良,以更接近 Antherea 血淋巴。Grace用這種培養基建立了第一個連續細胞系。適 當補充添加劑后,該基本培養基已用于培養各種昆蟲細胞,包括多種鱗翅類以及一些雙翅類昆蟲。Grace昆蟲細胞培養基主要作為 培養基基礎,用于培養Sf9 和Sf21細胞系,也用于其它鱗翅類昆蟲細胞系的生長和維持。
Grace's培養基(Grace’s Insect Cell Culture Medium) 是無血清培養基,使用時需要補充血清,從而為細胞提供必要的營養因子。添加5 -20%胎牛血清后,Grace昆蟲細胞培養基可以用于培養多種昆蟲細胞。
配制方法:
1. 用900ml組織培養級水重懸52.4g,輕輕地不斷攪動使粉末*溶解。不要加熱!
2. 加入0.35g碳酸氫鈉或4.7ml 7.5% 碳酸氫鈉溶液。攪動至*溶解。
3. 用1N KOH調節pH至6.2。用NaOH可能會導致沉淀出現。
4. 定容至1000ml。
5. 調節滲透壓,對于鱗翅類細胞系,適滲透壓為340 - 360mOsm/KgH2O。加入0.4g KCl或0.3g NaCl到1L培養基 中可以提高10mOsm/KgH2O。加入27.8ml水到1L培養基中可以降低滲透壓10mOsm/KgH2O。
6. 用0.22μm或更小的濾膜過濾培養基。加入無菌的添加劑。分裝到無菌容器中。
7. 靜止避光保存在2-8°C冰箱中。可以保存1年。
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