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352次中文名稱:胰蛋白酶-CaCl2溶液(0.1%)
用途:培養(yǎng)細胞的消化,或者一些組織的消化
注意事項:無菌溶液,主要由0.25%胰酶或胰蛋白酶、0.1%氯化鈣組成,過濾除菌。
儲存條件:-20℃,12個月
簡介:胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后,小腸內的腸肽酶會活化該酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點在于已經活化的胰蛋白酶,能夠繼續(xù)活化geng多胰蛋白酶原,這種過程即自動催化。胰蛋白酶在小腸工作,它會將蛋白質水解為肽,進而分解為氨基酸,其適溫度約為37℃;主要由0.25%胰酶、0.1%氯化鈣等組成,經過濾除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化,或者一些組織的消化,通常室溫下1min左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細胞。
操作步驟(僅供參考):
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-CaCl2 solution,略蓋過細胞即可,室溫放置0.5~2min,不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的*細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入Trypsin-CaCl2;solution重新消化
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g離心1min,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化
不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
注意事項:
1、盡量減少反復凍融的次數(shù),以免失效。
2、在使用胰酶細胞消化液的過程中,要特別注意避免消化液被細菌污染。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期:12個月有效
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