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357次產品名稱:堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)
規格:4×20ml/4×2ml/4×10ml
儲存條件: —20℃,避光,6個月
用途: 用于石蠟切片、冰凍切片、骨髓細胞涂片、血液涂片等的堿性磷酸酶染色,又稱同時偶聯法
注意事項:堿性磷酸酶活性部位呈紅色,位于胞槳中。非特異性反應少,結果可靠。
簡介:堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase,簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動物組織內,其活性所需適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質交換活躍之處(細胞膜),如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內皮,還見于內質網、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。
堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶聯法(又稱同時偶聯法),其原理是在pH9.2~9.8的堿性條件下,細胞內堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解,釋放出磷酸不萘酚,后者不偶聯重氮鹽生成有色產物,定位于細胞質中。該染液可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位呈藍色,位于胞槳,結果較金屬鹽沉淀法可靠。
自備材料:
1、載玻片、濕盒
2、普通光學顯微鏡
操作步驟(僅供參考):
一、涂片或切片
1、血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無需固定),水洗。
2、滴加配制好的ALP孵育液,放入濕盒中,避光孵育15~20min,水洗。
3、入核固紅染色液或甲基綠染色液復染3~5min。
4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。
二、貼壁培養細胞
1、取6孔板或其他容器培養的細胞,棄液,PBS清洗干凈。
2、加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10~15min,PBS清洗。
3、滴加配制好的ALP孵育液,放入濕盒中,避光孵育15~20min,PBS清洗。
4、入核固紅染色液或甲基綠染色液復染3~5min。
5、PBS清洗、鏡檢。
染色結果:
ALP活性部位:藍色
細胞核:紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)
注意事項:
1、血液或骨髓細胞涂片或其他樣本均應新鮮,薄厚適宜,及時固定,否則會影響酶的活性。
2、培養細胞染色操作過程中,清洗、染色等步驟都應輕微,以免損傷或丟失細胞。
3、ALP孵育液易失效或降低陽性強度,即配即用,不宜久置。
4、復染時,核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。
5、每次染色時,應有陽性對照片。
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