中文名稱：MTT溶液(5mg/ml)
產品規(guī)格：5mL|10mL
用途：又稱四氮唑鹽，常用于細胞增殖及細胞毒性檢測
注意事項：主要由MTT\四氮唑鹽組成。
儲存條件：-20℃，避光，12個月

簡介：MTT比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法。MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。MTT檢測原理在于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色Formazan并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。在特定溶劑(如DMSO)存在的情況下，可以被*溶解。然后通過酶標儀可以測定570nm波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。

操作步驟：
1、細胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對數(shù)生長期，常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細胞(懸浮細胞無需消化)。
2、低速離心，收集細胞沉淀。
3、用培養(yǎng)液重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸液，并計數(shù)。
4、細胞接種于96孔培養(yǎng)板，一般接種密度為3000～10000 /孔。通常細胞增殖實驗每孔加3000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入6000個細胞即可。具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定。
5、37℃5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)或按照實驗具體需要進行培養(yǎng)，一般培養(yǎng)6～24h。
6、按照實驗具體要求，給予0～20μl干預藥物處理，37℃5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)至合適時間。
7、棄培養(yǎng)液，每孔加入MTT solution和新鮮培養(yǎng)液，在細胞培養(yǎng)箱內繼續(xù)孵育。
8、棄培養(yǎng)液，每孔加入DMSO，置搖床上低速振蕩，使結晶物充分溶解。如果紫色結晶較小或較少，溶解的時間會短一些。如果紫色結晶較大或較多，溶解的時間會長一些。
9、在酶聯(lián)免疫檢測儀570nm測定各孔吸光度。

注意事項：
1、MTT+solution(5mg/ml)盡量減少反復凍融的次數(shù)，以免失效，當顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。
2、由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，應注意蒸發(fā)問題。