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黏蛋白染色液(溫和甲基化法)操作步驟

時間:2021/6/21閱讀:284
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中文名稱:黏蛋白染色液(溫和甲基化法)
產品規格:2×50mL
用途:區分黏蛋白中酸性基團:羧基和硫酸根
注意事項:酸性甲醇與阿利新藍聯合使用,碳水化合物含有羧基呈陰性,出現任何著色則意味著含有硫酸根。
儲存條件:4℃,避光,12個月

產品說明:黏蛋白染色液(溫和甲基化法)屬于化學修飾和阻斷法的一種,其原理是利用酸性醇溶液消除COOH的嗜堿性。
Alcian染色液pH值為2.5時,組織內的羧基電離,帶有一個負電荷,與阿利新藍中的陽離子形成鹽鍵,使帶有羧基的組織(如蛋白多糖/透明質酸以及上皮酸性黏蛋白)染色,主要用于鑒別黏蛋白中的酸性基團。

自備材料:系列乙醇、恒溫箱、蒸餾水、去離子水

操作步驟(僅供參考):
1.兩張陽性對照片和兩張實驗切片均脫蠟至水。
2.將一張陽性對照片和一張實驗片入酸性醇溶液,37℃孵育4h。另外的一張陽性對照片和一張實驗片僅用去離子水37℃孵育4h。
3.流水沖洗5min。
4.Alcian染色液染色15-30min。
5.流水沖洗。
6.梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。


染色結果:
未處理的硫酸黏蛋白、硫酸蛋白多糖、唾液粘蛋白、透明質酸   藍色
處理后的切片    淡藍色
注:處理后的殘存的任何顏色都是由于存在硫酸黏蛋白和(或)硫酸蛋白多糖。


注意事項:
1.處理時間超過4h有可能導致硫酸根水解。
2.需要陽性對照片以便驗證甲基化程序的有效性。
3.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操

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