中文名稱：臺盼藍染色液(0.4%)
英文名稱：Trypan Blue Stain solution,0.4%
CAS：72-57-1
分子式：C34H24N6O14S4Na4
分子量：960.81
產(chǎn)品規(guī)格：50mL|100mL
用途：又稱錐蟲藍染色液，用于細胞染色，細胞計數(shù)
儲存條件：4℃，12個月

簡介：臺盼藍（Trypan Blue），一種偶氮、親水性酸性藍色染料，可透過死亡細胞和垂死細胞的細胞膜，將其染成藍色，而活細胞由于其細胞膜的完整性，可將臺盼藍排斥在外，因此，通過顏色的變化即可將活細胞（活細胞呈透明無色）和死細胞鑒別開來，基于此原理，本品廣泛用于細胞活性水平的常規(guī)評估。臺盼藍還可染色膠原和淀粉樣蛋白。臺盼藍與蛋白結(jié)合形成的復(fù)合物可發(fā)出紅色熒光。另外，臺盼藍（合適濃度）還常用來淬滅細胞表面的自熒光或者其他熒光信號。

本品為溶于生理鹽溶液的0.4%（w/v）臺盼藍染色液，以無菌形式提供，細胞培養(yǎng)級別。

使用方法：
1.對于懸浮細胞，離心收集細胞，充分清洗后，用適當(dāng)緩沖液如PBS，HBSS重懸制成單細胞懸液；對于貼壁細胞，先用胰酶消化細胞，再按照懸浮細胞的方法制備單細胞懸液。

2.取0.5ml單細胞懸液，按照:比例與0.5ml 0.4%臺盼藍染色液充分混勻，室溫染色3~0min。
【注】：因臺盼藍具有細胞毒性，染色時間過久會導(dǎo)致部分死細胞染色，干擾計數(shù)。
【注2】：若細胞密度比較高，可取0.2ml單細胞懸液，經(jīng)適當(dāng)緩沖液稀釋到0.5ml，之后再用0.5ml 0.4%臺盼藍染色液染色。

3.取少量上述染色細胞加入血細胞計數(shù)板，于顯微鏡低倍鏡下計數(shù)，分別計算著色細胞（即損傷細胞和死細胞）和總細胞。
【注】：用移液槍加染色細胞時，沿著蓋玻片的邊緣輕輕加液使其*覆蓋住整個小室。不可過量加液或者不足量。
【注2】：mm2方格內(nèi)細胞數(shù)通?？刂圃?0-50 cells，當(dāng)細胞數(shù)超過200個，需重新調(diào)整稀釋倍數(shù)。

4.按照以下公式來計算細胞數(shù)目和活細胞百分比，
a，計算每ml細胞數(shù)目：Cells/ml=mm2大方格內(nèi)的平均細胞數(shù)×稀釋倍數(shù)×04；
【注】：此時的稀釋倍數(shù)為：步驟2所取的單細胞懸液與臺盼藍染色液混合后的稀釋倍數(shù)
b，總細胞數(shù)目：Total cells=（Cells/ml）×最初制備單細胞懸液的總體積
c，細胞活力值：Viability（%）=（總細胞數(shù)-總著色細胞數(shù)）/總細胞數(shù)×00
【注】：通常情況，健康的對數(shù)期培養(yǎng)細胞，活細胞至少占到95%。

注意事項：
1、懸浮細胞用此法時必須經(jīng)離心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan 的生成不僅與活細胞數(shù)成比例，也受作用時間的影響，因此當(dāng)樣品較多時測定的OD 值可能隨時間而變。
3、MTT 溶液為黃色，需避光保存，長時間光照會導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。