【產品名稱】：7型膠原抗體
【英文名】：Anti-Collagen VII
【規格】：0.1ml/0.2ml（更大包裝可詳詢）
【濃度】：1mg/1ml
【抗體來源】：Mouse,Rabbit or Goat
【*類型】：polyclonal or monoclonal
【產品類型】：一抗
【性狀】：Lyophilized or Liquid
【亞型】：IgG
【純化方法】：affinity purified by Protein A
【儲 存 液】：0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
【產品應用】：not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
【保存條件】：Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.  

7型膠原抗體CollagenVII免疫標記，Western Blot抗體雜交：孵育一抗
A. 先將需要檢測的抗體準備好，并決定好它們的稀釋度。
B. 配好5%的Milk（TBST溶解），按要求稀釋好抗體。注意，如需高比例稀釋，采用梯度稀釋。
C. 將稀釋好的抗體和膜一起孵育。 一般采用RT 1小時，可根據抗體量和膜上抗原量適當延長或縮短時間。
注意：為了便于后面分析結果，我們一般會選用已確定分子量大小基質金屬蛋白酶-1抗體MMP1免疫標記，免疫組化實驗操作步驟（以石蠟切片為例）
儀器、設備：移液槍、免疫組化筆、水浴鍋、計時器、孵育濕盒、切片架、蓋玻片、光學顯微鏡、洗瓶等。

操作步驟：
1.脫蠟水化。將石蠟切片置于新鮮二甲苯脫中浸泡 15 分鐘，重復三次。去除多余的液體后，依次置于無水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇，各浸泡 5 分鐘，蒸餾水（或自來水）沖洗 5 分鐘。用 PBS 緩沖液（試劑 1，將干粉溶解于 1L 去離子水中）沖洗切片 5 分鐘，重復三次。
2.抗原修復。將脫蠟水化后的組織切片置于燒杯（或修復盒）中的耐高溫塑料切片架上，加適量修復液 1× 檸檬酸鈉抗原修復液（試劑 2，將 100×檸檬酸鈉抗原修復液加去離子水稀釋成 1×檸檬酸鈉抗原修復液），液面要浸過切片組織一定高度，將修復盒置于沸水中煮沸修復 15 分鐘后取出玻片，自然涼至室溫。用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘，重復三次。
注意：抗原修復時，修復液務必保證切片始終浸泡在液體內，一般情況：修復液的量約為 800mL/1 架。3.阻斷內源性過氧化物酶。用吸水紙擦干玻片，免疫組化筆在組織周圍畫圈，滴加 50μL 內源性過氧化物酶阻斷劑（試劑 3）到切片組織上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育 30 分鐘，用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘，重復三次。
4.血清封閉。用吸水紙擦干玻片，滴加 50μL 正常山羊血清工作液（試劑 5），37℃封閉 20 分鐘，以減少非
特異性染色。
5.一抗孵育。用抗體稀釋液（試劑 4）將一抗原液稀釋成工作液，用吸水紙擦干玻片組織周圍的液體，滴加適量抗體工作液，置于濕盒 4℃孵育過夜或 37℃孵育 1h-2h。
6.復溫。4℃過夜后從冰箱拿出樣本，在室溫下孵育 15min 復溫（抗體孵育為 4℃過夜選用此步驟，如室溫孵育直接進入下一步清洗）。用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘，重復三次。
7.二抗孵育。吸水紙擦干切片后滴加 50μL 生物素標記的羊抗兔 IgG（試劑 6），37℃孵育 20  分鐘，用 PBS
緩沖液沖洗切片 5 分鐘，重復三次。
8.三抗孵育。吸水紙擦干切片后滴加 50μL 辣根酶標記的鏈酶卵白素孵育（試劑 7），37℃孵育 20  分鐘，用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘，重復三次。
9.顯色。甩去 PBS 緩沖液，吸水紙擦干切片； 每張切片滴加新鮮配制的 DAB 工作液 50μL（試劑 8：試劑 9：試劑 1=1:1:18  比例配置），孵育 3-5min，光學顯微鏡下觀察染色結果，切勿顯色過深；顯色后用自來水沖洗切片終止顯色。
10.復染。滴加適量蘇木素染液（試劑 10）復染，孵育 1-5 分鐘，自來水沖洗 5 分鐘，滴加鹽酸酒精分化
液分化 30 秒，自來水沖洗。
11.脫水封片。將玻片依次置于 70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、無水乙醇，各浸泡 5 分鐘， 再將玻片放入二甲苯中浸泡 15 分鐘，重復三次。玻片取出來稍晾干，用中性樹膠封片。

結果判斷：在光學顯微鏡下對染色的切片觀察并判斷。蘇木素染細胞核為藍色，DAB 顯色的陽性表達為棕黃色。

注意事項：
1.檢測樣本時需同時做陰性對照和陽性對照，否則結果不可取。
2.本品中的配套試劑，請不要用其他生產商產品替換使用。
3.DAB 為致癌物質，請采取必要的防范措施，現用現配。
4.本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療。
5.此試劑是否可用于除中性福爾馬林或多聚甲醛之外固定的組織未得到驗證。