中文名稱:QAE葡聚糖凝膠A-25
英文名稱:QAE Sephadex A-25
CAS:89382-89-2
性    狀：白色微球,干燥狀
凝膠類型：離子交換填料，強堿型
結構成分：交聯右旋糖酐
粒    徑： 40-120μm
工作PH值：2-12
操作溫度：4-40℃
總離子交換量：2.6-3.4mmol/g干膠
交換載量：1.5mg thyroglobulin/ml drained medium；10 mg HSA/ml drained medium；
110mg α-lactalbumin/ml drained medium；
保存條件：RT
應用：利用離子交換作用，純化低分子質量蛋白、多肽、核苷酸及巨大分子等

使用方法
2.1 填料的準備
將干粉浸泡于純水或緩沖液中，液體可以適當多加一些，室溫下*溶脹需1-2 天，或者用熱水溶脹1小時（不要水浴）。*溶脹后除去上清液以及上層少許漂浮物，用緩沖液*清洗填料。

2.2 裝柱
（1）所有實驗材料均需平衡至色譜層析操作的溫度，所有的緩沖液進行脫氣處理；
（2）檢查層析柱所有部件，特別是過濾網，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。
（3）用去離子水清洗掉20%乙醇保存液，用緩沖液配成勻漿。
（4）將柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位，務必使底端無氣泡。
（5）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。
（6）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33 倍的流速流過，使柱床穩定（注意壓力不要超過填料最大耐壓）。

2.3 平衡柱子
用上樣的平衡緩沖液平衡柱子后即可上樣。（當流出液的pH 和電導值與起始緩沖液相同時層析柱即*平衡）。

2.4 上樣
樣品應溶解在起始平衡緩沖液中，或者通過透析或脫鹽的方法進行緩沖液置換，將樣品緩沖液轉移至起始平衡緩沖液。樣品的粘度不應超過平衡緩沖液，上樣前必須使用0.45um 微孔濾膜對樣品進行過濾。
最常見的程序是讓目標分子結合到離子交換柱上，其他雜質流出。然而，在一些情況下，離子交換柱結合雜質而使目標分子流出，這樣的操作也是可以的。
對于目標分子的吸附，選擇具有適當pH 的緩沖液是至關重要的。
緩沖液的離子強度應保持較低，以免干擾樣品結合，推薦的操作pH 應在緩沖液pKa 的0.5 個單位內，并且和目標分子的等電點（pI）相差至少一個pH 單位。

2.5 洗脫
對于DEAE 葡聚糖凝膠和QAE 葡聚糖凝膠填料，一般使用鹽濃度遞增或pH 值遞減（線性或者階梯梯度）的方式來進行洗脫。

2.6 再生
根據樣品的性質，通常通過用高離子強度洗脫緩沖液，如2M NaCl 對柱子進行洗滌，或降低緩沖液pH，然后在平衡緩沖液中重新平衡來進行再生。在一些應用中，諸如變性蛋白質或脂質的物質在再生過程中洗脫不下來，則需要通過在位清洗程序CIP 來清除。

2.7 在位清洗（CIP）
通過用5 倍柱床體積的2M NaCl 溶液來除去結合的蛋白質。
通過用2 倍柱床體積的0.1M NaOH 溶液清洗填料，隨后立即用大量純水*清洗直至中性，從而除去沉淀的蛋白質、疏水結合的蛋白質和脂蛋白。

3 保存
未使用的填料，請室溫密閉保存。使用完的填料，用純水*沖洗，用然后保存在20%乙醇中，4°C保存，不能冷凍。

4 注意事項
（1）上樣之前，樣品必須經過膜過濾及去除色素，否則雜質及色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。所有的緩沖液均需要用0.45um 的過濾器過濾。
（2）在使用過程中，避免使用高濃度的強酸強堿，酸和堿的濃度應低于0.1 摩爾。堿會使流速變慢。
（3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據相關的文獻進行。
（4）離子交換介質在選擇層析柱時，避免使用細長柱，會增加實驗操作壓力。