名稱： 瓊脂糖凝膠4B（Sepharose4B）
排阻極限：60000~20*106(球蛋白）

供應商：古朵生物
形狀：球型
粒徑：50-160μm
流速：11.5cm/h
耐壓：0.008MPa
ph工作范圍：1-9（長時間），3-11（短時間，在位清洗）
包裝：10L、5L、500ml、100ml、25ml
應用：用于生物制藥和生物工程下游蛋白質、核酸及多肽的凝膠色譜純化
規格：100ml
保存條件： -20℃
類別：分子 PCR

這里介紹部分填料使用說明：對于凝膠過濾來說，層析柱的選擇一般根據分離樣品的種類和樣品的數量而定。純化蛋白質時，柱床體積應為樣品體積的25～100倍。去除鹽及游離熒光素約為樣品體積的4～10倍。柱太短，影響分離效果。柱長一些，分離效果好，但柱太長，則延長分離時間，樣品也稀釋過度。層析柱的內徑也要選擇適當。內徑過細，會發生“器壁效應”，即靠近管壁的流速要大于中心的流速影響分離效果。所以層析柱的內徑和高度應有一定的比例。對于除鹽來說應為1︰5～1︰25；對于純化蛋白質來說應為1︰20～1︰100。

凝膠柱的裝填方法和要求，基本上與離子交換柱的制備相同。一根理想的凝膠柱要求柱中的填料(凝膠)密度均勻一致，沒有空隙和氣泡。通常新裝的凝膠柱用適當的緩沖溶液平衡后，將帶色的蘭葡聚糖–2000、細胞色素，或血紅蛋白等物質配制成質量濃度為2g/L的溶液過柱，觀察色帶是否均勻下移，以鑒定新裝柱的技術質量是否合格，否則，必須重新裝填。
1 化學和物理性質。
葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯度，因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。
葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細級的葡聚糖凝膠是用于需要*分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程，可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外，粗級也可用于批量工藝。
1.1 化學穩定性
葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑（除非它被化學降解）。它在水、鹽溶液、堿和弱酸性溶液中都是穩定的，在強酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長期接觸氧化劑將破壞凝膠，因而應避免使用。
1.2 物理穩定性
葡聚糖凝膠并不熔融，可以在濕態、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質。干態的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯度。

2  使用方法
2.1 乙醇浸泡
    在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干。
2.2 無鹽水浸泡
    室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹。
2.3 鹽酸浸泡
    在常溫下再用0.1M HCl浸泡12小時，間隙攪拌，濾干，水洗只中性。
2.4 裝柱
將溶脹好的凝膠根據裝柱要求一次性置入柱內，注意保持濕態裝柱，并避免柱內產生氣泡或斷層。
2.5 平衡
上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）。
2.6 上樣
凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調整；脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關，柱高控制在40-50cm以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1即可。
2.7 洗脫方法
    可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。
2.8 清洗
    每次用完之后，將柱子里的緩沖液置換為去離子水，然后用20%的乙醇封存。
2.9 在位清洗（CIP）
     凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

3.1 色譜柱裝填
（1）所需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體做脫氣處理。填料可直接稱量需要的量用緩沖液溶漲一小時裝柱即可，如果不好溶脹，可適當加熱。
（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空氣，關閉柱子出口，在柱內保留少量的20%乙醇。20%乙醇容易產生氣泡，可以在里面加1%吐溫避免氣泡產生。也可以換成純水裝柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也換成純水，具體的方法取需要體積的填料在抽濾漏斗上進行，也可以小心傾去填料上的20%乙醇，再換成5倍體積的純水，反復沉淀去上清，5次左右就可以用于裝柱子。
（3）此填料顆粒比較細，所以一定要注意柱子要選擇合適的篩網，不能漏，也可以取點填料加到篩網上試試，如果沒有問題再將填料連續倒入柱子時，要用玻璃棒的緊靠柱子內壁引流，以減少氣泡的產生，讓填料先自然沉降到填料體積不再變化，而填料和上面的液體很好分層，上層溶液*澄清，就可以開泵用適當的流速壓柱子，填料體積不再變化后，再把轉換頭緊頂在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于裝柱子的流速。
（4）在裝柱子前，填料從冰箱中取出至少要室溫放置2-3個小時，這樣避免裝柱子時由于溫度變化而使柱子中產生氣泡。
3.2 蛋白的結合
樣品的鹽濃度和pH要盡量和平衡柱子的緩沖液一致，鹽濃度過高或者pH帶低也許掛不上，所以要根據自己的樣品做適當調整。
3.3 蛋白的洗脫
這個填料如果采用線性梯度洗脫，柱子的直徑和高度比是大于10，數值越大越有利于分離，而且樣品別上太多，可以按約10mg/ml上樣，如果采用階段洗脫的方法，裝短粗柱子就可以，上樣量也沒有限制。階段洗脫容易放大，重復性好，如果洗脫條件好*可以得到和線性梯度一樣或者更好。采用什么方法*根據自己需要。

4 再生清洗
（1）用完之后用0.1M 醋酸洗5個柱體積，然后用2M NaCl洗5個床體積，再用水洗至中性，然后用20%乙醇保存。
（2）有機溶劑和水混合很容易產生氣泡，為了避免這樣情況，可以把配好的有機溶劑在室溫放置過夜，再使用，這樣可以避免氣泡進柱子而導致柱子不能正常使用。

5 保存
在20%乙醇中，4℃下長期保存。
特別注意：
上樣之前，樣品至少用0.45微米膜過濾，盡量去除色素，否則色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。
在使用過程中，不能使用強酸強堿，酸和堿的濃度應低于0.15摩爾。