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血紅素抗體/Heamachrome操作步驟

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抗體名: 血紅素 / 血紅素抗體
抗體英文名: Heamachrome/Heamachrome antibody
應用范圍: WB=1:100-500ELISA=1:500-1000IHC-P=1:100-500IHC-F=1:100-500IF=1:100-500(石蠟切片需做抗原修復)
宿主: Rabbit
供應商:古朵生物
抗原來源: 詳情參見說明書
保質期: 見說明書
適應物種: Human,
標記物: HRP,Biotin,Gold,FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7,PE,Alexa Fluor 350,Alexa Fluor 7816,apc各標記物詳情詢
克隆性: 單克隆
保存條件: 低溫
形態: Lyophilized or Liquid
亞型: IgG
免疫原: Full length Heamachrome protein


抗體,也叫免疫球蛋白 (Ig),是一種能特異性結合抗原的糖蛋白,而抗原是在易感染動物體內引發抗體產生的物質。在體內,抗體是由于外 源性分子的侵襲而產生的。抗體以一個或者多個 Y 字形單體存在,每個 Y 字形單體由 4 條多肽鏈組成,包含兩條相同的重鏈和兩條相同的輕 鏈。輕鏈和重鏈是根據它們的分子量大小來命名的。Y 字形結構的頂端是可變區,為抗原結合部位。
任何一個抗體的輕鏈都可以分為κ或λ型(基于小分子多肽結構上的差異),每一個抗體的重鏈則決定了它的類或型。抗體制備是指通向抗體生成的步驟,包括抗原樣品的制備以及將其安全注入實驗動物或家畜體內,并由此誘發抗原特異性抗體在血清內達到高表達水平,然后可從該動物體內回收抗體。


抗體交聯法:
⑴ 以0.3Mol/L pH 9.5硼酸鹽緩沖液將鐵蛋白稀釋成20mg/ml~25mg/ml。
⑵ 以1︰1000(W/W)的比例加入XC液室溫攪拌45min,離心去沉淀。
⑶ 以0.3Mol/L pH 9.5硼酸鹽緩沖液將提純lgG配成5mg/ml,以1︰4的比例(V/V)加入IgG與鐵蛋白-XC液,4℃攪拌48h。
⑷ 以0.1Mol/L碳酸銨溶液透析過夜,以除去多余的異氰酸鹽,再以0.05Mol/l pH 7.5 PBS透析,使pH值恢復到生理水平。
⑸ 超速離心 以1.00×105g離心5h,去上清,沉淀以0.05Mol/L PBS懸浮,再次離心,以除去未結合的IgG。
⑹ 以血清學及免疫學方法測定結合抗體的特異性、免疫活性以及標記效應,如果操作步驟嚴格,結果是滿意的。


單抗原理:
抗體主要由B淋巴細胞合成。每個B淋巴細胞有合成一種抗體的遺傳基因。動物脾臟有上百萬種不同的B淋巴細胞系,含遺傳基因不同的B淋巴細胞合成不同的抗體。當機體受抗原刺激時,抗原分子上的許多決定簇分別激活各個具有不同基因的B細胞。被激活的B細胞分裂增殖形成多克隆,并合成多種抗體。如果能選出一個制造一種專一抗體的細胞進行培養,就可得到由單細胞經分裂增殖而形成細胞群,即單克隆。單克隆細胞將合成一種決定簇的抗體,稱為單克隆抗體。


單抗的制備過程:
1.動物免疫:注射特定抗原蛋白
2.分離脾淋巴細胞:與培養好的骨髓瘤細胞混合,人工誘導細胞融合。
3.細胞融合:淋巴細胞雜交瘤的制備
4.雜交瘤細胞的篩選:HAT選擇培養基篩選出雜交瘤細胞。
5.培養雜交瘤細胞:體外培養雜交瘤細胞,從培養液中分離提取單克隆抗體。或者,將雜交瘤細胞移植到小鼠腹腔內,從小鼠腹水中分離提取單克隆抗體。
6.單克隆抗體的制備和凍存、純化

 

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