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大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒技術說明

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產品名:大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒
英文名稱:Rat Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISA Kit
產品規格:48T/96T
產品產地:進口/國產
檢測方法: ELISA酶聯免疫法
檢測波長:450nm
研究領域:炎癥研究、神經生物學、新陳代謝、信號通路、免疫學。
測試種屬:人、大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、豬、雞、鴨elisa試劑盒等種屬
保存條件:2~8℃,*溫度6攝氏度,有效期6個月。
用途:主要用于科研方面,不用于臨床診斷。可以用于檢測各種指標。

 

大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法
1.血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生li鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 


大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒技術原理及自備設備:
ELISA技術原理是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。
大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒自備設備有,蒸餾水,加樣器,振蕩器及磁力攪拌器,酶標儀,量筒,燒杯,吸水紙,坐標紙,溫育箱,洗瓶,一次性試劑管,微移液及其吸嘴等。


注意事項:
實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
若顯色過淺,可適當延長底物溫育時。
標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應。保存過久可發生聚合在ELISA中可使本底加深。
凍結標本溶解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛混合,不要在混勻器上強烈震蕩。
渾濁或有沉淀的標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。
反復凍融會使蛋白效價降低,所以代測樣本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。

 

操作步驟:
(1)雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法。夾心法利用兩種一抗對目標抗原進行捕獲和固定,在確保靈敏度的同時大大提高了反應的特異性,該方法的檢測靈敏度可提高到pg級的水平。將已知抗體包被到固相表面,加入待檢標本,標本中若含有相應抗原即與固相表面的抗體結合,洗滌去除未結合成分,加入該抗原特異的酶標記抗體,洗去未結合的酶標記抗體,加底物后顯色。若標本中無相應抗原,固相表面即無抗原結合,加入的酶標記抗體則不能結合于固相并被洗滌去除,當加入無色底物后,因無酶催化故不顯色。雙抗體夾心法適用于測定2價或2價以上的大分子抗原,但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心。
(2)間接法是檢測抗體zui常用的方法,其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體,故稱為間接法。先將待測的蛋白包被在孔板內,然后依次加入一抗、酶標記u akn 的二抗和底物顯色,通過儀器(例如酶標儀)定量檢測抗原。這種方法操作簡單但由于高背景而特異性較差,目前已逐漸被夾心法取代。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標二抗建立檢測相應抗體的方法。間接法成功的關鍵在于抗原的純度。間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性抗體。
(3)競爭法可用于測定抗原,也可用于測定抗體。當抗原材料中的干擾物質不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,因此陽性反應呈色淺于陰性反應。如抗原為高純度的,可直接包被于固相。如抗原中有干擾物質,直接包被不易成功,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應的抗體,然后加入抗原,形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質,然后再加入標本和酶標抗體進行競爭結合反應。小分子抗原或半抗原因缺乏可用于夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,zui后的顯色也愈淺。

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