支原體早發(fā)現(xiàn)于 1898 年，1956 年 Robinson LB 從細(xì)胞培養(yǎng)物中分離出支原體。它廣泛存在于自然界中。污染細(xì)胞常見的支原體包括發(fā)酵支原體（M.Fementans）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）、口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginina）、梨支原體（M.pirum）、唾液支原體（M.salivarium）和人型支原體（M.hominis）。

支原體的特點：

1、支原體是小、簡單、能夠自我復(fù)制的原核生物，其大小介于細(xì)菌和病毒之間。

2、結(jié)構(gòu)簡單，無細(xì)胞壁，形態(tài)多樣，可通過細(xì)菌濾器。

3、對一般抗生素不敏感，是細(xì)胞培養(yǎng)污染的一種常見微生物。

4、多數(shù)支原體污染比較隱蔽，顯微鏡下觀察，可見單個荷包樣菌落。

5、被支原體污染后的細(xì)胞培養(yǎng)物，引起細(xì)胞形態(tài)學(xué)和功能的改變，且很難清除。

支原體污染的特征：

    細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變

    細(xì)胞生長模式的改變

    細(xì)胞活力減弱

    轉(zhuǎn)染效力顯著降低

    培養(yǎng)基上可見黑色顆粒

    細(xì)胞表面可見黑色孔洞

支原體污染的檢測：

1、電子顯微鏡技術(shù)

電鏡中可看到支原體的多種增殖方式。

該技術(shù)快速、簡便、省事省力，但敏感性不夠高，能作為篩查方法，而對于可疑或陽性的細(xì)胞株，需要其他方法檢測鑒定。

2、培養(yǎng)法

支原體在固體培養(yǎng)基上形成特征的「油煎蛋」菌落。

理想的培養(yǎng)法應(yīng)采用多功能的培養(yǎng)基，以降低假陰性率，為增加對低滴度和低活力支原體檢出率，應(yīng)采用有氧和無氧兩種培養(yǎng)條件及幾種傳代方式，或者與生物化學(xué)試驗相結(jié)合檢測支原體。

3、染色法

（1）姬姆薩或地衣紅染色

姬姆薩染色后為淡紫色或藍(lán)色，地衣紅染色鏡下觀察可見支原體呈暗紫色小點，位于細(xì)胞外或細(xì)胞之間。

（2）DNA 熒光染色法

支原體污染的細(xì)胞不僅在細(xì)胞核而且在細(xì)胞核外及細(xì)胞膜上均可見散在熒光。

該方法操作較為簡便，但輕度污染不易檢出，且 DNA 熒光染色靈敏度不高、檢測時需要熒光素及熒光顯微鏡，不能檢測到種，一般要求培養(yǎng)無污染的指示細(xì)胞作為對照。

4、PCR 檢測法

PCR 檢測方法已經(jīng)成為一種常用的有效檢測微生物的方法，尤其適用于培養(yǎng)困難和抗原性復(fù)雜的細(xì)菌檢測鑒定，可快速檢測細(xì)胞培養(yǎng)物、生物制品、血清等生物材料中的支原體污染，比常規(guī)培養(yǎng)法和 DNA 間接熒光染色法快 5-10 天。

目前，北京寶威特生物提供性價比*的專門針對支原體污染的全面解決方案，根據(jù)不同的用戶需求，提供國產(chǎn)和進口兩套支原體檢測產(chǎn)品。

支原體解決方案包括：

1、針對高度保守的支原體 16SrRNA 序列設(shè)計，可檢測的支原體種類非常廣泛，不會受真核細(xì)胞或細(xì)菌 DNA 干擾。

2、基于普通 PCR 方法的產(chǎn)品：普通版可檢測 49 種支原體，升級版更可廣泛檢測超過 209 種支原體，并配備了三重核查系統(tǒng)，確保結(jié)果準(zhǔn)確。

3、新開發(fā)的基于實時熒光 PCR 方法的產(chǎn)品：可檢測 70 種支原體，顯著提高了檢測的敏感性使其檢測限達到 10 CFU/ml，并配備了內(nèi)部質(zhì)控和陽性質(zhì)控以確保實時熒光 PCR 檢測結(jié)果的有效性。

4、經(jīng)本試劑盒測試的支原體菌株包括：肺炎支原體（M.pneumoniae）、精氨酸支原體（M.argnini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）、發(fā)酵支原體（M.fermentans）、口腔支原體（M.orale）和無膽甾支原體（A.laidlawii），涵蓋了所有常見的支原體污染種類。

5、檢測所需的試劑都預(yù)先混合、并分裝至反應(yīng)管，只需加入模板 DNA 即可。

6、通過 8 聯(lián)管檢測體系有效避免交叉污染。

7、配套用于預(yù)防支原體污染的噴霧，以及用于消除支原體污染的抗生素溶液，全面清除支原體的污染。