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上海古朵生物科技有限公司

基因轉染實驗(DEAE-葡聚糖轉染法)操作步驟

時間:2018-10-29閱讀:1617
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DEAE-葡聚糖介導的 細胞轉染 ,其原理還不清楚,可能是通過內吞噬作用而使 DNA 轉導進入細胞核,此法只適合暫時轉染實驗,轉染效率與DEAE-葡聚糖濃度以及 細胞 與 DNA/DEAE-葡聚糖混合液接觸時間的長短很有關系,可采用較高濃度的DEAE-葡聚糖(1g/L)作用較短時間(30分鐘-1.5小時),又可用較低濃度(250g/L)的DEAE-葡聚糖作用較長時間(8小時).


方法如下:
(1)接種鼠L 成纖維細胞 濃度為5×105CO2/孔/皿生長2~3天,當達50%板底面積可用.


(2)乙醇沉淀的4μg的PSV2-neo質粒DNA,空氣干燥后溶于40μL的TE中,或取供體 DNA .


(3)用10ml 1×PBS、4mL、10%富合生長因子血清的DMEM洗板(皿).


(4)在80μl熱的10g/L DEAE-葡聚糖中緩慢加入DNA,取120μL DNA/DEAE-葡聚糖加到每孔(皿)細胞中,使其分布均勻輕輕轉動直到顯示均勻一致的紅色,培養4小時.


(5)從孔(皿)中吸出DNA/DEAE-葡聚糖,加入5mL 10%DMSD,室溫放置1分鐘,吸出DMSO,用5mL 1×PBS洗一次吸出,加入10mL培養液(10%血清的DMEM).


(6)培養細胞,在適當時間分析細胞,若含有抗藥基因,可用G418選擇培養液培養,方法同前.
    *,科研工作者在進行醫藥方面的科學研究之前,需要制定完善的統計研究設計方案,那么什么樣的設計方案才稱得上是完善的呢?一般來說,完善的設計方案需具備以下幾個條件:實驗所需的人力、物力和時間資源;實驗設計的“三要素”和“六原則”均符合專業和統計學要求,對實驗數據的收集、整理、分析等有一套規范的規定和正確的方法.而其中準確把握統計研究設計的“三要素和六原則”,是科學實驗設計的核心.

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