熒光素酶

自然界中的熒光素酶：是自然界中能夠產(chǎn)生熒光的酶的系統(tǒng)，如發(fā)光真菌，發(fā)光海星，發(fā)光魚，發(fā)光節(jié)蟲，發(fā)光甲蟲等。

螢火蟲熒光素酶：目前常用的螢火蟲熒光素酶來源于北美螢火蟲（Photinus pyralis）,是一個61KDa的單體酶，無需表達后修飾，直接具有*酶活性，反應(yīng)需要底物熒光素以及ATP、氧氣、鎂離子等。

海腎熒光素酶：來源于海腎（Renilla reniformis），是一個36KDa的單體酶，表達后無需修飾，即可具有*酶活，反應(yīng)只需要腔腸素和O2參與。

Gussia熒光素酶：來源于海洋橈腳類生物Gaussia princeps，是一個19.9kDa單體酶，只有185個氨基酸，具有一個16aa 的分泌信號肽，可以被細胞分泌到細胞外，反應(yīng)只需要腔腸素和O2參與。

腔腸素/Coelenterazine

美國Goldbio品牌的兩種腔腸素，分別是天然腔腸素/Coelenterazine及其衍生物Coelenterazine 400a。

天然腔腸素/Coelenterazine：普 遍認為是天然的腔腸熒光素，是海腎熒光素酶（Rluc）的作用底物，具有許多用途。可用于檢測活細胞中鈣離子濃度，基因報告分析，BRET（生物發(fā)光共振 能量轉(zhuǎn)移）研究，ELISA，HTS，組織或細胞中超氧陰離子和過亞硝酸鹽的化學(xué)發(fā)光檢測，在460-470nm之間發(fā)射熒光。分子式：C26H21N3O3 分子量: 423.48 g/mol ，純度：95% ，保存：-15°C避光，保存在惰性氣體下。
 

腔腸素400a/ Coelenterazine 400a: 是BRET研究中海腎熒光素酶（Rluc）的首shou底物，此腔腸素衍生物在390 nm和400nm之間發(fā)藍色光，對GFP acceptor的光發(fā)射干擾小。分子式：C26H21N3O 分子量：: 391.48 g/mol ，純度：95%，保存：-15°C避光，保存在惰性氣體下。

此外，Nanolight 除了提供天然腔腸素/Coelenterazine和Coelenterazine 400a，還提供體內(nèi)實驗用水溶性腔腸素，體外實驗水溶性腔腸素，Coelenterazine h，Coelenterazine f，Coelenterazine e等。

還在為找不到水溶性腔腸素而煩惱嗎？還在為溶解腔腸素的溶劑對動物的毒害而煩惱嗎？下面介紹的水溶性腔腸素，將解決您的煩惱！

體內(nèi)實驗水溶性腔腸素/Water-soluble Coelenterazine (CTZ-SOL) for in vivo use：腔 腸素用于體內(nèi)成像研究時通常是結(jié)合其他醇類溶解在丙二醇或甲醇中。大劑量的靜脈注射丙二醇在短時間內(nèi)即可產(chǎn)生毒性，包括高滲透壓，增加陰離子間隙代謝性酸 中毒（由于乳酸中毒），急性腎損傷，似敗血癥綜合癥。

而使用水溶性腔腸素可以避免此類情況的發(fā)生，是制定的等滲透壓，容易由腎臟分泌。因此除了重復(fù)靜脈注 射，水溶性的腔腸素可以注入的濃度高達500µg/100µl ，在體內(nèi)的腔腸素水平達到很高，并產(chǎn)生較高的Gaussia熒光素酶信號。成分：天然腔腸素 +用于水溶的無毒添加劑。

采用體內(nèi)實驗水溶性腔腸素優(yōu)點：

1.無毒、等滲透壓、無丙二醇、無酒精。

2.保質(zhì)期長，密封在真空中。

3.在無菌水中快速溶解。

4.低粘度，適合注射。

5.由于分裝成等量小份因此能保證質(zhì)量一致性(10 mg將被分裝成20 份每份500 ug)。

體外實驗水溶性腔腸素/Water-soluble Coelenterazine (CTZ-SOL) for in vitro use：成 分包括天熱腔腸素+水溶添加劑，產(chǎn)品規(guī)格：215 ug/瓶，加入10ml水后終濃度是50uM，加入5ml水后終濃度是100 uM。儲存：在密封狀態(tài)下-80°C長期保存，-20°C短期保存，儲存環(huán)境為干燥和黑暗。

使用：可根據(jù)您的需求添加水溶性緩沖溶液（如.PBS），渦旋 后，用分光光度記分析結(jié)果。產(chǎn)品優(yōu)點：使用方便，無需先在乙醇中溶解。為達到*效果可以用不同的緩沖溶液溶解。

腔腸素h /Coelenterazine h：與Renilla熒光素酶或Gaussia熒光素酶使用具有一定的局限性。體外研究中比其他類似物更適合與鈣離子激活發(fā)光蛋白共用。據(jù)報道，Coelenterazine h的發(fā)光強度高于天然腔腸熒光素10-20倍，因此是用來檢測鈣離子濃度微小變化的有力工具。

腔腸素f /Coelenterazine f： 腔腸素f與天然腔腸素的區(qū)別是氟取代了天然腔腸素R-1酚基上的羥基。當腔腸素f作用于分離的水母發(fā)光蛋白能夠激活部分已氧化的腔腸素亞穩(wěn)定復(fù)合物，與天 然腔腸素相比合成的復(fù)合物僅產(chǎn)生總量子數(shù)的80% 。

腔腸素f的優(yōu)點：即需要更少的時間來形成發(fā)光蛋白復(fù)合物，這一般來說是非常慢的過程（天然腔腸素一般在60分鐘內(nèi)只能完成40%）。然而由于大量快速發(fā) 射光與鈣離子有關(guān)，在同樣的增長時間里發(fā)光蛋白復(fù)合物約產(chǎn)生多于20倍的信號且與天然腔腸素一樣產(chǎn)生更少的*相同的發(fā)射光譜。

e-Coelenterazine/腔腸素e：一種天然腔腸素衍生物，結(jié)構(gòu)上比天然腔腸素多了一個乙基，形成了一個額外的環(huán)。作為海腎熒光素酶的底物，其熒光強度是天然腔腸素的137%，其初始熒光強度是天然腔腸蘇素的750%。