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慢病毒包裝:慢病毒載體(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基礎上改造而成的病毒載體系統,它能高效的將目的基因(或RNAi)導入動物和人的原代細胞或細胞系。慢病毒載體基因組是正鏈RNA,其基因組進入細胞后,在細胞漿中被其自身攜帶的反轉錄酶反轉為DNA,形成DNA整合前復合體,進入細胞核后,DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉錄mRNA,回到細胞漿中,表達目的蛋白;或產生RNAi干擾。慢病毒載體介導的基因表達或RNAi干擾作用持續且穩定,原因是目的基因整合到宿主細胞基因組中,并隨細胞基因組的分裂而分裂。
另外,慢病毒載體能有效感染并整合到非分裂細胞中。以上特性使慢病毒載體與其它病毒載體相比,比如不整合的腺病毒載體、整合率低的腺相關病毒載體、只整合分裂細胞的傳統逆轉錄病毒載體,有鮮明的特色。大量文獻研究表明,慢病毒載體介導的目的基因長期表達的組織或細胞包括腦、肝臟、肌肉、視網膜、造血干細胞、骨髓間充質干細胞、巨噬細胞等。慢病毒載體不表達任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位無細胞免疫反應,體液免疫反應也較低,不影響病毒載體的第2次注射。
慢病毒包裝的優點:
1、能將外源基因有效整合入宿主染色體,外源基因表達水平較高、表達穩定;
2、廣泛的宿主,可感染分裂和不分裂的細胞,幾乎可以感染所有類型的細胞,特別適合質粒載體轉染效率低的細胞;
3、適用范圍廣,可用于體外細胞系和活體動物模型,研究基因和RNAi等;
4、轉導效率高,不需要轉染試劑,目的基因整合到宿主細胞基因組的概率大大增加。
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