標簽：elisa試劑盒 古朵生物 緩沖液

　　古朵簡述：elisa試劑盒包被條件?

　　elisa試劑盒包被條件 包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用于。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。

　　IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力，其聯(lián)結多發(fā)生在Fc段上，抗體結合點暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預包被，其后通過抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復性亦佳。

　　間接包被的另一優(yōu)點是抗原用量少，僅為直接包被的110乃至于100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測抗DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。可將聚苯乙烯板先經紫外線照射(例如30W紫外燈，75cm照射12小時)，以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質，如聚賴氨酸、也可提高核酸的結合力。

　　脂類物質無法與固相載體結合，可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質自然干固在固相表面。抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般采用這種包被方式。 ELISA包被時我們通常使用PH9.6的緩沖液的原因是什么呀，為什么不用中性或酸性的包被液呢。

　　包被緩沖液的選擇要依靠你所包被的物質而定,沒有絕對的選擇,但有一個原則就是要盡可能的保持包被物的活性不被損失.目前常用的包被緩沖液有PBS,CBS,tris鹽緩沖液,咪脞緩沖液等,一般來說,緩沖液的pH要大于蛋白質的pI,以保持其活性. 堿性包被液如碳緩用的較多，尤其是在小分子和載體蛋白的偶聯(lián)物的包被，其主要的優(yōu)勢在于堿性環(huán)境可以使蛋白更容易的與板子結合。

　　也有用PBS和檸檬酸緩的，但是比較少見， 碳緩效果很好，又易于配置，所以CC用的最多啊 為什么緩沖液的PH大于蛋白的PI包被效果好呢，跟蛋白的帶電荷情況有沒有關系， 蛋白和聚苯乙烯板子結合的詳細過程目前上不是很明了，目前認為是通過靜電吸附在板子上的，而聚苯乙烯板子一般在出廠前也要經過強電廠處理以提高吸附能力!肯定和蛋白的帶電情況有關，包被緩沖液并不一定都是PH9.6 的CB，不同的蛋白選用不同的包被緩沖液可以得最佳的包被效果，從上面可以看出和蛋白的帶電情況有明顯的相關性!

　　為什么緩沖液的PH要大于包被蛋白的PI? 一是因為蛋白質與酶標板的結合主要是靠疏水作用的物理吸附。而緩沖液的PH略大于包被蛋白的PI，有利于蛋白質疏水鍵的適當暴露。 二是因為酶標板聚苯乙烯表面暴露的主要是C-H鍵，而緩沖液的PH略大于包被蛋白的PI，可以使蛋白質帶上負電荷，有利于蛋白質與酶標板的牢固結合，提高包被效率。所以我們常用的包被液體多位PH9.6的緩沖液，當然對PI低的蛋白質也有使用PH7.4的包被液的情況。 最重要的原因：防止蛋白和蛋白的吸附

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