小鼠雙鏈DNA(dsDNA)ELISA試劑盒

　　(用于血清、血漿、細胞培養上清液和其它生物體液內)

　　原理

　　本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗小鼠 dsDNA 單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 dsDNA與單抗結合，加入生物s化的抗小鼠dsDNA，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物s結合，加入底物工作液顯藍色，最后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，dsDNA濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中dsDNA濃度。

　　試劑盒組成(2-8℃保存)

　　酶標板(Coated Wells)96孔酶標抗體工作液(Enzyme Conjugate)12ml

　　10×標本稀釋液(Sample Buffer)12ml20×濃縮洗滌液(Wash Buffer)50ml

　　標準品(Standards)：1000ng/瓶2瓶底物工作液(TMB Solution)12ml

　　第一抗體工作液(Biotinylated Antibody)12ml終止液(Stop Solution)12ml

　　準備試劑與收集血樣

　　1. 收集標本：血清、血漿(EDTA)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存，避免反復凍融。標本可能需要稀釋,請先做預實驗,以確定稀釋倍數。

　　2. 標準品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成2000ng/ml的溶液。設標準管8管，第一管加標本稀釋液900ul，第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在第一管中加入2000ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。

　　3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

　　4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋(示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

　　小鼠雙鏈DNA試劑盒檢測程序

　　1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。

　　2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。

　　3. 每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。

　　4. 洗板：同前。

　　5. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。

　　6. 洗板：同前。

　　7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鐘。

　　8. 每孔加入100ul終止液混勻。

　　9. 30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

　　結果計算與判斷

　　1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算。

　　2. 以標準品200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 ng/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。

　　3. 根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應dsDNA含量，再乘上稀釋倍數即可。

　　試劑盒性能

　　1. 靈敏度：最小的dsDNA 檢測濃度小于1.4ng/ml。

　　2. 特異性：可同時檢測重組或天然的小鼠dsDNA。不與小鼠其它細胞因子有交叉反應。

　　3. 重復性：板內、板見變異系數均小于9.7%。

　　小鼠雙鏈DNA試劑盒注意事項

　　1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔，每次測定應同時做標準曲線。

　　2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高。

　　3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

　　4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

　　5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷!

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