本產(chǎn)品僅用于科研實驗！

　　TWIK相關(guān)酸敏感鉀離子通道蛋白9抗體

　　規(guī)格：以IHC工作液每個樣品用量為100ul來計算，按照稀釋比例1:400來計算，本試劑盒中一抗規(guī)格100ul可以檢測400個樣品以上。

　　保存：不使用時取試劑盒中一抗保存-20℃，其他均保存 2-8 ℃

　　試劑盒特點：利用LAB-SA第二代技術(shù)生產(chǎn)的免疫組化檢測試劑，特點是高靈敏度，特異性強、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰等、低倍景染色，直接滴加，操作方便，孵育時間短，適用于冷凍切片、石蠟切片及固定的細(xì)胞涂片。可用于檢測細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性抗原。

　　溫馨提示：本檢測試劑盒適用于人、大小鼠，兔等絕大多數(shù)組織，但對于內(nèi)源性生物s含量比較豐富的組織(如腎臟、肝臟等)，應(yīng)選用非生物s檢測系統(tǒng)，或用avdin 封閉。

　　產(chǎn)品特點

　　TWIK相關(guān)酸敏感鉀離子通道蛋白9抗體含試劑：

　　1、一抗(應(yīng)用：IHC-P=1:400-800 IHC-F=1:400-800 )

　　2、無色試劑：內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑

　　3、試劑A：封閉用正常山羊血清工作液

　　4、試劑B：生物s標(biāo)記二抗工作液：生物s標(biāo)記羊抗兔IgG

　　5、試劑C：辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液

　　6、顯色液D液 (棕色) 1ml

　　7、顯色液E液(白色)20ml

　　用戶自備試劑：

　　一、0.1M PBS (pH7.2-7.4)緩沖液：

　　PBS(phosphate buffered solution)即磷酸鹽緩沖液，能夠提供相對穩(wěn)定的離子環(huán)境和pH緩沖能力，是生物學(xué)中經(jīng)常使用的緩沖鹽溶液，用于分子克隆及細(xì)胞培養(yǎng)等，pH為7.2-7.4，與人體血液等滲，主要成分為磷酸二氫鉀、氯化鈉以。

　　二、檸檬酸鈉抗原修復(fù)液：

　　可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲q、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復(fù)。可以有效去除醛類固定試劑導(dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián)，充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。

　　抗原修復(fù)方法：

　　方法1：沸水浴修復(fù)，將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于沸水浴環(huán)境，保持外部沸騰狀態(tài)15min，自然冷卻至室溫。

　　方法2：微波修復(fù)，將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于微波爐中，高火5min，停火3min，中火5min，自然冷卻至室溫。

　　方法3：高壓修復(fù)，將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于高壓鍋，上汽后修復(fù)2-5min，然后將高壓鍋置入涼水中，減壓至正常后取出玻片

　　抗原修復(fù)注意事項：

　　1)脫蠟水化的切片，應(yīng)避免因切片干燥，而至非特異性染色。

　　2)熱修復(fù)操作時務(wù)必謹(jǐn)慎，當(dāng)心燙傷。

　　3)熱修復(fù)時間過長易導(dǎo)致脫片，請注意控制時間。

　　三、DAB(二氨基聯(lián)b胺)染色液：

　　過氧化物酶將使底物發(fā)生反應(yīng)，于反應(yīng)部位產(chǎn)生棕色沉淀物。標(biāo)本顯色時間一般為室溫 5~20分鐘，請在顯微鏡下觀察顯色況，顯色充分后應(yīng)將標(biāo)本及時脫水封固。

　　TWIK相關(guān)酸敏感鉀離子通道蛋白9抗體實驗前準(zhǔn)備：

　　安裝步驟與維護(hù)一)一抗稀釋的準(zhǔn)備：

　　方法1. 實驗前，將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋(或PBS稀釋)，將稀釋后的抗體分裝5-10支(20ulx5支或10ulx10支)，放入-20℃保存，用一支拿一支，避免反復(fù)凍溶。

　　方法2. 實驗前,也可將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋50ul(或PBS稀釋50ul)成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存，用多少吸多少。

　　方法3. 預(yù)試驗可做幾個梯度1：100、200、400背景高還可做上去，選一個適合的稀釋比例，再正式做。工作液的稀釋-使用抗體稀釋液。

　　二)DAB顯色液的制備實驗準(zhǔn)備：在1毫升試劑E(DAB 底物液)中，加入1滴(約50微升)試劑D(DAB濃縮液)，混合均勻，即配成DAB工作液。此溶液必須現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后避光保存，6小時內(nèi)使用，剩余的液體應(yīng)棄去。標(biāo)本顯色時間一般為室溫 5~20分鐘，請在顯微鏡下觀察顯色的情況，顯色充分后應(yīng)將標(biāo)本及時脫水封固。

　　TWIK相關(guān)酸敏感鉀離子通道蛋白9抗體實驗步驟(建議方案)：

　　1、石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水

　　2、蒸餾水沖洗，pbs 浸泡5 分鐘(如需采用抗原修復(fù)，在此步驟后進(jìn)行)。

　　3、3%雙氧s去離子水(無色液體)孵育15-20 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧物酶活性。

　　4、滴加試劑A(藍(lán)色液體)室溫孵育15-20 分鐘，傾去，勿洗。

　　5、滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2-3 小時或4℃過夜。

　　6、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

　　7、滴加試劑B(黃色液體)，室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

　　8、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

　　9、滴加試劑C(橙色液體)，室溫或37℃孵育15-20 分鐘。

　　10、PBS 沖洗，3 分鐘3 次。

　　11、顯色劑顯色(DAB 或AEC)

　　12、自來水充分沖洗。

　　13、如果需要，可進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明。

　　14、選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/p>

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