植物中脂氧合酶(LOX)試劑盒的測定原理是什么?

　　測定意義： LOX 廣泛存在于動植物組織中，催化不飽和脂肪酸氧化反應，導致膜脂過氧化。在生物體 的生長發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。

　　測定原理： LOX 催化亞油s氧化，氧化產(chǎn)物在 280nm 處有特征吸收峰;測定 280nm 吸光度增加速率， 來計算 LOX 活性。

　　自備儀器和用品： 研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、可調(diào) 式移液槍和蒸餾水。

　　試劑組成和配制：

　　試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

　　試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。 試劑三：粉劑×1 支，4℃保存。

　　粗酶液提取： 按照組織質(zhì)量(g)：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿。16000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測。

　　測定： 1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 280 nm，蒸餾水調(diào)零。

　　2. 在試劑三中加入 10mL 試劑二(振蕩混勻 1min)，在 30℃水浴中預熱 10 min 以上。用不 完的試劑 4℃保存。

　　3. 對照管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 樣本和 180μL 試劑二，30℃反應 30min 后，記錄 A 對照。

　　4. 測定管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 樣本和 180μL 試劑三，30℃反應 30min 后，記錄 A 測定。 5. ΔA=A 測定-A 對照

　　LOX 活性計算：

　　(1)按照蛋白濃度計算 活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化 0.01 個單位為 1 個酶活單位。 LOX (U/mg prot) =ΔA×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T×100 = 33.33×ΔA÷Cpr

　　(2)按照樣本質(zhì)量計算 活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化 0.01 個單位為 1 個酶活單位。

　　LOX (U/g 鮮重) =ΔA×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T×100 = 33.33×ΔA÷W Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL

　　需另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒; V 反總：反應體系總體積，200μL=0.2mL;V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02mL; W ：樣品質(zhì)量，g;V 樣總：上清液總體積，1mL;T：反應時間，30min。

　　植物中脂氧合酶試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質(zhì)量"的方針。