關于細胞樣的操作步驟及注意事項

　　一、操作步驟：

　　1、在37℃ 5% CO2條件下將細胞加在處理的載玻片上，用培育基培育，時間通過預試驗確定;

　　2、細胞長好后，用洗刷液洗2分鐘×3次，室溫下將其放入細胞固定液中固定30-60min，蒸餾水洗刷;

　　3、室溫下用洗刷液充沛洗刷固定細胞，(干燥后-20℃冰凍保存2周以上)

　　4、雜交前將固定的細胞進行如下處理;順次在70%，90%，100%的乙醇中浸泡，脫水每次5min，用二jia苯洗刷，除掉殘留脂質順次在100%，90%，70%乙醇中浸泡，進行再水化，每次5min，后浸泡于洗刷液中;

　　5、在37℃用胃蛋白m溶液10min處理固定的細胞，以增加細胞對大分子試劑的通透性，再用洗刷液洗5min;

　　6、用1%甲醛固定10min，用洗刷液洗凈。

　　二、留意：

　　1、所有溶液都必須用RNA酶抑制劑處理。

　　2、操作中重要的是及時固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理，以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外，過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。

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