細胞周期檢測試劑盒(PI)實驗資料

　　細胞周期檢測試劑盒是利用細胞內DNA能夠和熒光染料結合的特性，細胞各個時期其DNA含量不同從而結合的熒光染料不同，流式細胞儀檢測的熒光強度也不一樣來檢測細胞周期。 細胞周期(cell cycle)是指細胞從前一次分裂結束起到下一次分裂結束為止的活動過程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期組成。G1期：細胞開始RNA和蛋白質的合成，但DNA含量仍保持二倍體。S期：DNA開始合成，這時細胞核內DNA的含量介于G1期和G2期之間。當DNA復制結束成為4倍體時，細胞進入G2期。G2期的細胞繼續合成RNA及蛋白質，直到進入M期。因此，單純從DNA含量無法區分G2期和M期。一旦有絲分裂發生，細胞分裂成兩個細胞，這兩個細胞或者進入下一個細胞周期，或者進入靜止期(G0期)，而G0期從DNA含量上同樣無法與G1期區分。因此，整個復制周期可以描述為G0/G1、S、G2/M期。通過核酸染料PI標記DNA,并由流式細胞儀進行分析，可以得到細胞各個時期的分布狀態，計算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在腫瘤病理學研究中，通常以S期細胞比率作為判斷腫瘤增殖狀態的指標。 PI為插入性核酸熒光染料，能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結合，其結合的量與DNA的含量成正比例關系，用流式細胞儀進行分析，就可以得到細胞周期各個階段的DNA分布狀態，從而計算出各個期的百分含量。PI染色后，假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。 貝博® BBcellProbe® 可以提供各種細胞檢測試劑盒。包括細胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細胞代謝、氧化應激、細胞膜流動性、膜通透性轉換孔、細胞耗氧率、細胞內pH、細胞粘附、細胞自噬等數百種檢測試劑盒產品。 貝博® BBcellProbe® 可以為您提供各種顏色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等細胞膜、細胞質、細胞核、溶酶體、線粒體、內質網、高爾基體、骨架、微管等細胞、細胞亞結構熒光染色試劑盒產品，以及鈣離子、鈉離子、氬離子等各種熒光染色試劑盒產品。 貝博® BBcellProbe® 可以提供動物、植物、微生物、酵母、水產、家禽、獸類、土壤等樣本的各種生化指標檢測的數百種試劑盒產品。

　　保存溫度：-20℃避光

　　注意事項：

　　1.染液短期2周內可以2-8℃保存。染料長期不用可以-20℃保存。避免反復凍融。

　　2.試劑拆封后請盡快使用完!

　　有效期：1年

　　檢測方法：

　　流式細胞儀

　　適用樣本：

　　1.懸浮細胞 2.貼壁細胞

　　產品特點：

　　產品應用

　　流式細胞儀

　　儀器準備

　　1.流式細胞儀

　　2.離心機

　　3.移液器

　　4.冰箱

　　5.冰盒

　　試劑準備：

　　1.PBS 緩沖液(pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液(1X))

　　2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)

　　耗材準備：

　　1.離心管

　　2.吸頭

　　3.一次性手套

　　使用注意事項：

　　1.細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

　　2.最好使用含EDTA的細胞消化液。

　　3.洗滌細胞離心轉速不可超過800×g。

　　4.乙醇固定時離心大概采用2000×g力5分鐘，離心力太小可能部分細胞難以沉淀。? 5.固定時在振蕩器上輕輕振蕩細胞，并緩慢滴加75%乙醇，直接加入會導致細胞團聚的現象，很難重懸成單細胞?；蛘呦扔美銹BS懸浮細胞，充分懸浮，使細胞充分分散成單細胞。之后緩慢加入無水乙醇，終濃度為70-90%乙醇。乙醇固定之后須無細胞沉淀。

　　使用方法：

　　1. 收集樣本細胞，細胞數量在5-10X106個。

　　2. 用冷PBS洗滌細胞兩次。

　　3. 在15ml離心管中，用500 μl PBS重懸細胞。

　　4. 滴加2-5ml冷乙醇4℃固定過夜或-20℃固定1小時。

　　5. 取5X106細胞，在15ml錐形離心管中1000×g離心10分鐘，棄上清，收集細胞。

　　6. 用冷PBS洗滌細胞兩次。

　　7. 用500 μl冷PBS重懸細胞。

　　8. 加入Rnase A溶液20 μl， 37℃水浴30分鐘。

　　9. 用400目細胞篩網過濾。

　　10. 在1000×g離心10分鐘，棄上清，收集細胞。

　　11. 加入400 μl PI染液重懸細胞，輕輕混勻后4℃避光孵育30分鐘-1小時。

　　12. 流式檢測結果。激發波長為488nm。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。

　　常見問題分析：

　　1.染色后找不到細胞?

　　固定細胞可能難以離心沉淀;固定細胞可能成團;固定細胞膜容易損傷成碎片。操作過程中注意以上幾點。

　　2.可以不固定細胞嗎?

　　本試劑盒可以用于非固定細胞的周期檢測。

　　細胞周期檢測試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。