ELISA雙抗體夾心法操作步驟：

　　(1)包被：用包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1-10 μg/mL。在酶標板反應孔中加0.1 mL，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗板3 次，每次3 min。

　　(2)加樣：加一定濃度稀釋的待檢樣品(同時做空白對照，陰性對照孔及陽性對照)0.1 mL 于上述已包被的反應孔中，置濕盒中，37℃， 1 hr。用洗滌緩沖液洗板3 次，每次3 min。

　　(3)加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體 (經滴定后的稀釋度) 0.1ml。37℃，0.5 - 1 hr，用洗滌緩沖液洗板3 次，每次3 min。

　　(4)加底物液顯色：于各反應孔中加入現配的TMB 底物溶液0.1 mL，37 ℃，10 - 30min。

　　(5)終止反應：于各反應孔中加入終止液0.05 mL。

　　(6)結果判定：將酶標板在酶標儀上，于450 nm (若ABTS 顯色，讀410 nm)，讀數，輸出到Excel 中。

　　(7)以標準品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，生成標準曲線和直線回歸方程式，根據公式計算未知樣品的濃度，并記錄。

　　雙抗夾心法分雙抗體夾心測抗原和雙抗原夾心測抗體，方法都是類似的。就以雙抗體夾心測抗原為例吧 大概步驟如下 ：

　　1、將異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。

　　2、加待檢標本，保溫反應，洗滌除去未結合物質。

　　3、加酶標抗體，保溫反應，洗滌除去未結合物質。

　　4、加底物顯色。

　　ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。