ACK紅細胞裂解液的作用原理及使用步驟

　　紅細胞裂解液是一種去除紅細胞的方法，即用裂解液裂解紅細胞，它既不損傷有核細胞又能充分的去除紅細胞。

　　紅裂解液裂解是一種比較溫和的紅細胞去除方法，主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細胞的分離純化，淋巴細胞的分離純化以及組織細胞蛋白與核酸提取等實驗中紅細胞的去除。

　　經(jīng)紅細胞裂解液裂解得到的組織細胞中不含紅細胞，可進一步用于原代培養(yǎng)、細胞融合、流式細胞分析、核酸與蛋白的分離和提取等。

　　紅細胞裂解液的作用原理：

　　細胞裂解液一般都使用含酶的，在血紅細胞表面上有紅細胞專屬的表面抗原，當裂解液中可以攻擊特定紅細胞表面抗原的酶的時候就只會造成紅細胞的變性，生物通道擴大、裂解，或者引起紅細胞的變性而不會攻擊其它的細胞，另外紅細胞有自己的電負性、滲透脆性(通常是一些非酶細胞裂解液的突破點)懸浮穩(wěn)定性，這都是區(qū)別于其他種類細胞的區(qū)別點。

　　紅細胞裂解液就是利用這些特性裂解紅細胞的，另外紅細胞裂解液不能達到100%準確的裂解紅細胞，總會或多或少導致其他種類細胞的裂解。

　　產(chǎn)品簡介：

　　紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)，也稱ACK Lysis Buffer，是一種用于從人或鼠等的血液或組織樣品中裂解并去除無細胞核紅細胞的溶液。

　　本裂解液經(jīng)過優(yōu)化配方，在裂解紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。 本裂解液的主要有效成分為氯化銨。本裂解液不適用于有細胞核紅細胞的裂解

　　本裂解液經(jīng)過無菌處理，處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。

　　產(chǎn)品內(nèi)容：

　　貨號 PMK0011-120 PMK0011-500

　　紅細胞裂解液 120ml 500ml

　　使用步驟：

　　對于組織細胞樣品：

　　1.新鮮組織經(jīng)過膠原酶或ym等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

　　2.加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體積為1ml，則加入3-5ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。

　　3.400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

　　4.如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

　　5.洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500g離心2-3分鐘，棄上清。可再重復1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。

　　6.根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。

　　對于組織細胞樣品無需洗滌的快速操作步驟：

　　1.新鮮組織經(jīng)過膠原酶或ym等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

　　2.對于0.2ml細胞沉淀加入1ml紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。

　　3.加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。

　　4.400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

　　5.如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不wq，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

　　說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程中的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。

　　對于血液樣品：

　　1.取新鮮抗凝血，400-500g離心5分鐘，離心棄上清。

　　2.加入6-10倍細胞體積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體積為1ml，則加入6-10ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4-5分鐘，并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。

　　3.400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

　　4.如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解wq全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

　　5.洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，重懸沉淀，400-500g離心2-3分鐘，棄上清。可再重復1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。

　　6.根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。

　　對于血液樣品無需洗滌的快速操作步驟：

　　1.每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10分鐘，但通常不宜超過15分鐘，并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。

　　2.加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，混勻。

　　3.400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

　　4.如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不wq，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。

　　5.根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。

　　說明：對于常規(guī)步驟，多一步洗滌過程的離心，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。

　　注意事項：

　　本裂解液為無菌產(chǎn)品，請注意保持無菌，使用本產(chǎn)品時宜在超凈工作臺內(nèi)進行。

　　如果經(jīng)過紅細胞裂解液處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細胞時不必使用經(jīng)過DEPC處理過的溶液。

　　本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

　　為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

　　紅細胞裂解液上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。