降鈣素ELISA試劑盒操作時(shí)值得注意的步驟

　　降鈣素ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)，測(cè)定樣品中人降鈣素原水平，向預(yù)先包被了抗人降鈣素原抗體的酶標(biāo)孔中，加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，溫育后，加入標(biāo)記的抗降鈣素原抗體，再與HRP標(biāo)記的鏈霉親和素結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入顯色底物TMB，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色，在450nm處測(cè)定反應(yīng)孔樣品吸光度值，樣本中的人降鈣素原濃度與OD值成正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中人降鈣素原的濃度。

　　降鈣素ELISA試劑盒操作步驟：

　　1、加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

　　2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液100(臨用前配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37溫育1小時(shí)。

　　3、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400/每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

　　4、每孔加檢測(cè)溶液B工作液(臨用前配制)100，加上覆膜，37溫育1小時(shí)。

　　5、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

　　6、每孔加底物溶液90，酶標(biāo)板加上覆膜37避光顯色(反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯時(shí)，即可終止)。

　　7、每孔加終止溶液50，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

　　8、立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(值)。

　　降鈣素ELISA試劑盒在人體內(nèi)，主要由甲狀腺的濾泡旁細(xì)胞(也稱為C細(xì)胞)產(chǎn)生，在其他動(dòng)物中，由末咽體產(chǎn)生，它的作用是降低血鈣(Ca2+)，抵抗甲狀旁腺激素(PTH)，在魚類、爬行動(dòng)物、鳥類和哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)了降鈣素。

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