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產(chǎn)品名稱:*鏈cDNA合成試劑盒
英文名稱:RT EasyTM I
產(chǎn)品規(guī)格:25 rxns 100 rxns
系列:RT/RT-PCR系列
產(chǎn)品貨號:RT-01011
保存說明:-20℃
產(chǎn)品描述:高達65°C的逆轉(zhuǎn)錄溫度,有利于復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)RNA模板進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
RT EasyTM I:*鏈cDNA合成試劑盒 操作步驟:
1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50?l。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40?l,然后再加待測樣品 10?l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50?l,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50?l,再加入顯色劑 B50?l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50?l,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
ELISA 試劑盒 17 個相關(guān)操作技巧如下:
1. 切記在加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
2. 合理安排檢測量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
3. 在吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
4. 務(wù)必做雙孔實驗,這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,又能反映出試劑盒的精密度
5. 樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。
6. 為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
7. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,請于 2-8℃ 保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人 IgG 工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人 IgG 工作液。
8. ELISA試劑盒實驗中,加樣后及時放人孵箱,標(biāo)本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間,防止孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。
9. 剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng) 121℃ 高壓蒸汽滅菌 30 分鐘,或用 5.0g/L 次氯suan鈉等消毒劑處理 30 分鐘后廢棄。
10. 人 ELISA 試劑盒洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
11. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是后加底物溶液及 2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào) OD 值至零。
12. 手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置 15~30s,不要將一個酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
13. 對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。
14. 沒有去離子水或雙蒸水時,可以使用娃哈哈純凈水配制溶液,切勿使用自來水。
15. 在使用微量加樣器時,吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
16. 吸取液體時速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,人 ELISA 試劑盒吸取的量不夠準(zhǔn)確。
17. 吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸,減少誤差。
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