上海古朵生物供應Buffer SE, 250ml質粒相關溶液 上海古朵生物是一家集研發、銷售為一體的高新技術生物企業,公司專注于生命科學和生物技術領域,專業提供分子生物學、免疫學、生命科學基礎研究以及臨床檢測等諸多領域的試劑、耗材、儀器等各類產品及生物技術服務。
Buffer SE, 250ml質粒相關溶液 操作步驟
Ⅰ.使用質粒提取試劑盒提取質粒時請參考具體試劑盒的操作說明。如Omega公司的E.Z.N.A.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin [4] (質粒提取盒)。
Ⅱ.堿裂解手提法:此方法適用于小量質粒DNA的提取,提取的質粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下:
1:接1%含質粒的大腸桿菌細胞于2mlLB培養基。
2:37℃振蕩培養過夜。
3:取1.5ml菌體于Ep管(離心管),以4000rpm離心3min,棄上清液。
4:加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/LEDTApH8.0,25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合。
5:加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH,1%SDS),輕輕翻轉混勻,置于冰浴5min.
6:加入0.15m1預冷溶液III(5mol/LKAc,pH4.8),輕輕翻轉混勻,置于冰浴5min.
7:以10,000rpm離心20min,取上清液于另一新Ep管
8:加入等體積的異戊醇,混勻后靜置10min.
9:以10,000rpm離心20min,棄上清。
10:用70%乙醇0.5ml洗滌一次,抽干所有液體。
11:待沉淀干燥后,溶于50ulTE緩沖液中(或60℃溫育去離子水)
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