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大鼠 MTL elisa檢測試劑盒實驗原理和操作方法

閱讀:238發布時間:2019-01-18

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大鼠 MTL elisa檢測試劑盒   實驗原理:

 將目標抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的目標連接于固相載體上的抗體結合,然后加入微生物化的目標抗體,將未結合的*抗體洗凈后,加入HRP標記和親和素,再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃

大鼠 MTL elisa檢測試劑盒   操作方法

1. 實驗前 20 分鐘從冰箱中取出試劑盒,以平衡至室溫(20-25℃);

2. 取出所需數量的板條,其余密封放回 4℃;

3. 建立標準曲線:設標準孔 8 孔,每孔中各加入樣品稀釋液 100ul,一孔加標準品 100nl,混勻后用加樣器吸出 100ul,移至第二孔。如此反復對倍稀釋至第七孔,,從第七孔中吸出 100ul 棄去,使之體積均為 100ul。第八孔為空白對照;

4. 加樣:待測品孔中每孔加入待測樣品 100ul;

5. 將反應板置 37℃120 分鐘;

6. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干;

7. 每孔中加入一抗體工作液 50ul;

8. 將反應板充分混勻后置 37℃60 分鐘。

9. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干;

10. 每孔加酶標抗體工作液 100uL. 11. 將反應板置 37℃60 分鐘。

12. 洗板:同前。

13. 每孔加入底物液 100uL,置 37℃暗處反應 5-10 分鐘。

14. 每孔加入 50uL 終止液混勻。

15. 在 450nm 處測吸光值。(應盡快,時間過長可能導致本底偏高)


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