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白介素elisa試劑盒原理與操作

閱讀:351發布時間:2019-3-12

白介素elisa試劑盒

實驗原理:本試劑盒應用雙抗體加心法測定標本中人白細胞介素-25(IL-25)水平。用純化的人IL-25抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素-25(IL-25),再與HRP標記的IL-25抗體結合,形成抗體抗原美標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下準話成藍色,并在算的作用下轉化成終黃色。顏色的深淺和樣品中的IL-25呈正相關。用酶標儀在-450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品多種人白細胞介素-25(IL-25)濃度。

操作步驟:

標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在、第二孔中分別加標準品100ul,然后在、第二孔中加標準歐尼稀釋液50ul,混勻;然后一孔、第二孔中各取100ul分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50ul,幻云,然后在第三孔和第四孔中先各取50ul棄掉,再各取50ul分別加到第五、第六孔中,再在第五第六孔中分別加便準品稀釋液50ul,混勻,混勻后從第五、第六空中風去50ul分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻后從第七、第八孔中分別去50ul加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50ul,混勻后從第九第十孔中各取50ul棄掉。

加樣:分別設空白孔、待測空白孔。在酶標包被板上待測樣品孔重甲樣品稀釋液40ul,然后再加待測樣品10ul.加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕歡動混勻。

溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

加酶:每孔加入酶標試劑50ul,空白孔除外

顯色:每孔先假如顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50ul,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。

終止:每孔加終止液50ul,終止反應。

測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度。測定應再加終止液后15分鐘內進行


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