細節(jié)決定成敗 如何優(yōu)化ELISA？減少誤差
在elisa試劑盒實驗操作中，誤差分有系統(tǒng)誤差、偶然誤差、過失誤差，而一個小小的誤差主意能夠影響到實驗，很多人往往因為一個小細節(jié)，一個誤差沒能讓實驗成功。那么實驗誤差概率如何縮小？除了需要細心之外，還有一些需要重點注意的地方。今天教您優(yōu)化ELISA，減少誤差：
①：檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結(jié)和分析問題的能力，對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
②：使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。
③：仔細閱讀說明書，嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方，反復試驗確定成立后才能改進。
④：洗滌*，如若洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。
⑤：嚴控反應時間，反應時間過長，酶失活；反應時間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
⑥：注意試劑盒保存期，過保存期的試劑不能使用。
⑦：評估試劑的實用性，試劑的穩(wěn)定與否，對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。
⑧：嚴格掌握顯色時間，顯色時間過短，加入終止液反應終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應判為假陽性，這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結(jié)果。
⑨：加樣要準確、快速。如果加樣不準確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關，所以加樣應慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。
