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上海博湖生物科技有限公司
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更新時(shí)間:2019-05-17 09:35:55瀏覽次數(shù):651次
聯(lián)系我時(shí),請告知來自 智慧城市網(wǎng)致病性大腸桿菌(EPEC)核酸檢測試劑盒說明書中含有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)所需要各種試劑組分,如:引物、dNTPs、緩沖液、Taq酶等,PCR反應(yīng)液混合液中加入檢測樣品,即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳染色判斷,陽性樣本將在相應(yīng)大小的片段處出現(xiàn)特異性條帶。
產(chǎn)品名稱:致病性大腸桿菌(EPEC)核酸檢測試劑盒說明書
規(guī)格:48T/盒
編號(hào):BH-P4760
分類:熒光-PCR法
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。?
規(guī)格及成分:
產(chǎn)品名稱成 分 編 號(hào) 十孔盒包裝
MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶-RI 混合液 101105A 20 μL
MMLV Buffer-dNTP 混合液 101105B 60 μL
微量核酸沉淀劑 50903 400 μL
TdT(末端轉(zhuǎn)移酶) 120312 10 μL
2×TdT Buffer(含 dATP) 101105 200 μL
PCR MagicMix 3.0(含染料) 90805B 1mL×2
5′-RACE 引物 A-引物 B 混合液 yw373374 200 μL
5′-RACE 引物 C yw375 200 μL
RNase-Free 水 80403 1 mL
使用手冊 101105sc 1 份
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器*的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時(shí),大吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時(shí)的大吸收光譜在 500nm,大發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
HL-60(人早幼粒急性白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞;HK-2甲基纖維素(100000mPa.s)質(zhì)量規(guī)格:粘度100000mPa.sMethyl cellulose
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1036甲基纖維素(4000 mPa.s)質(zhì)量規(guī)格:4000mPa.s,BRMethyl cellulose, middle viscosity
人淋巴成纖維細(xì)胞 (HLF)( 5×105 )麗春紅4R,新胭脂紅,亮麗春紅5R,酸性紅18質(zhì)量規(guī)格:BSBrilliant ponceau 5R
CL-0423RIN-m5f(大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2酚藏花紅質(zhì)量規(guī)格:>80%Phenosafranine
人胰腺腺泡上皮癌;HPAC 大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL天狼星玫紅,BB質(zhì)量規(guī)格:ARSirius Rose BB
大鼠顆粒細(xì)胞(RGC)(1×106) U-2 OS, 人骨肉瘤細(xì)胞 Human*Fosinopril sodium質(zhì)量規(guī)格:度≥99.0%(HPLC)
人胚肺二倍體細(xì)胞;2BS*(速尿)Furosemide質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
IGSF8 Others Mouse 小鼠 PGRL / IGSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) *(標(biāo)準(zhǔn)品)Furosemide質(zhì)量規(guī)格:含量測定
人腎動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL*Gemfibrozil質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
F9細(xì)胞,小鼠畸胎瘤細(xì)胞 A549 [A-549](肺癌細(xì)胞) 人癌細(xì)胞;MDA-MB-453*(標(biāo)準(zhǔn)品)Gemfibrozil質(zhì)量規(guī)格:含量測定
致病性大腸桿菌(EPEC)核酸檢測試劑盒說明書CaEs-17 人食管癌細(xì)胞鋁絲,英文名或英文縮寫:Aluminum,級(jí)別:AR,99%,規(guī)格:50毫克
GBC-SD人膽囊癌細(xì)胞 GBC-SD cells in human gallbladder carcinomas RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS加醋務(wù)酯 cMYL FORMcTq 638-49-3
LEFTY2 Protein Human 重組人 Lefty2 / Lefty A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)DL-氫錄賴酸,英文名或英文縮寫:DL-Lysine monoxy7nochloride,級(jí)別:BR,99%,規(guī)格:100克
人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞 (HIBEC)( 5×105 ) HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系 Rattus新生霉素鈉,英文名或英文縮寫:Novobiocin wo7ium Salt,級(jí)別:BR,95%,規(guī)格:500毫克
C57BL/6小鼠T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞;RMA138-52-3水楊苷2-(xy7noxymetxyl)pxenyl-beta-D-glucopyranoside
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
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