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致病性大腸桿菌（EPEC）核酸檢測試劑盒說明書

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更新時間：2019-05-17 09:35:55瀏覽次數(shù)：650次

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產(chǎn)品簡介

致病性大腸桿菌（EPEC）核酸檢測試劑盒說明書中含有聚合酶鏈式反應(yīng)所需要各種試劑組分，如：引物、dNTPs、緩沖液、Taq酶等，PCR反應(yīng)液混合液中加入檢測樣品，即可進行PCR擴增反應(yīng)。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳染色判斷，陽性樣本將在相應(yīng)大小的片段處出現(xiàn)特異性條帶。

詳細介紹

產(chǎn)品名稱：致病性大腸桿菌(EPEC)核酸檢測試劑盒說明書
規(guī)格：48T/盒
編號：BH-P4760
分類：熒光-PCR法
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
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規(guī)格及成分：
產(chǎn)品名稱成分編號十孔盒包裝
MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶-RI 混合液 101105A 20 μL
MMLV Buffer-dNTP 混合液 101105B 60 μL
微量核酸沉淀劑 50903 400 μL
TdT（末端轉(zhuǎn)移酶） 120312 10 μL
2×TdT Buffer（含 dATP） 101105 200 μL
PCR MagicMix 3.0（含染料） 90805B 1mL×2
5′-RACE 引物 A-引物 B 混合液 yw373374 200 μL
5′-RACE 引物 C yw375 200 μL
RNase-Free 水 80403 1 mL
使用手冊 101105sc 1 份
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準曲線。
數(shù)據(jù)采集：
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器*的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時，大吸收光譜在 471nm，結(jié)合 DNA 時的大吸收光譜在 500nm，大發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
HL-60(人早幼粒急性白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞;HK-2甲基纖維素(100000mPa.s)質(zhì)量規(guī)格：粘度100000mPa.sMethyl cellulose

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY1036甲基纖維素(4000 mPa.s)質(zhì)量規(guī)格：4000mPa.s,BRMethyl cellulose, middle viscosity

人淋巴成纖維細胞 (HLF)( 5×105 )麗春紅4R,新胭脂紅,亮麗春紅5R,酸性紅18質(zhì)量規(guī)格：BSBrilliant ponceau 5R

CL-0423RIN-m5f(大鼠胰島β細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2酚藏花紅質(zhì)量規(guī)格：>80%Phenosafranine

人胰腺腺泡上皮癌;HPAC 大鼠冠狀動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL天狼星玫紅，BB質(zhì)量規(guī)格：ARSirius Rose BB
大鼠顆粒細胞(RGC)(1×106) U-2 OS, 人骨肉瘤細胞 Human*Fosinopril sodium質(zhì)量規(guī)格：度≥99.0%（HPLC）

人胚肺二倍體細胞;2BS*（速尿）Furosemide質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

IGSF8 Others Mouse 小鼠 PGRL / IGSF8 人細胞裂解液 (陽性對照) *（標(biāo)準品）Furosemide質(zhì)量規(guī)格：含量測定

人腎動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL*Gemfibrozil質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP,可用于細胞培養(yǎng)

F9細胞，小鼠畸胎瘤細胞 A549 [A-549](肺癌細胞) 人癌細胞;MDA-MB-453*（標(biāo)準品）Gemfibrozil質(zhì)量規(guī)格：含量測定
致病性大腸桿菌(EPEC)核酸檢測試劑盒說明書CaEs-17 人食管癌細胞鋁絲，英文名或英文縮寫：Aluminum，級別：AR，99%，規(guī)格：50毫克

GBC-SD人膽囊癌細胞 GBC-SD cells in human gallbladder carcinomas RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS加醋務(wù)酯 cMYL FORMcTq 638-49-3

LEFTY2 Protein Human 重組人 Lefty2 / Lefty A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)DL-氫錄賴酸，英文名或英文縮寫：DL-Lysine monoxy7nochloride，級別：BR，99%，規(guī)格：100克

人肝內(nèi)膽管上皮細胞 (HIBEC)( 5×105 ) HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系 Rattus新生霉素鈉，英文名或英文縮寫：Novobiocin wo7ium Salt，級別：BR，95%，規(guī)格：500毫克

C57BL/6小鼠T細胞淋巴瘤細胞;RMA138-52-3水楊苷2-(xy7noxymetxyl)pxenyl-beta-D-glucopyranoside
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。