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CY3-Isothiocyanate,CY3-ITC,CY3-異硫氰酸酯制備方法
CY3-Isothiocyanate (CY3-ITC) 是一種具有熒光特性的染料衍生物,常用于生物標(biāo)記和分子探針。它的制備通常涉及CY3染料和異硫氰酸酯基團(tuán)(-NCS)的結(jié)合。異硫氰酸酯基團(tuán)可以與氨基(例如蛋白質(zhì)上的氨基)反應(yīng),形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的標(biāo)記。
制備步驟
1. 準(zhǔn)備反應(yīng)物
CY3染料:選擇合適的CY3染料衍生物(如CY3-NHS酯或CY3-氨基)作為起始物料。常用的是CY3-NHS酯(NHS酯化合物),因?yàn)樗梢耘c親核基團(tuán)反應(yīng)。
異硫氰酸酯試劑:選擇異硫氰酸酯(R-NCS)試劑,通常需要與相應(yīng)的溶劑(如無(wú)水二甲基亞砜(DMSO)或氯仿)混合溶解。常用的異硫氰酸酯化學(xué)試劑為苯基異硫氰酸酯(Phenyl Isothiocyanate, PITC)或烷基異硫氰酸酯。
2. 反應(yīng)步驟
溶解CY3染料:將CY3染料(例如CY3-NHS酯)溶解在合適的溶劑中(如二甲基亞砜(DMSO)或無(wú)水乙腈)。使用適當(dāng)濃度(通常在1-10 mM范圍內(nèi))以確保反應(yīng)的充分性。
溶解異硫氰酸酯:將異硫氰酸酯(例如苯基異硫氰酸酯,PITC)溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲校ㄈ鏒MSO、氯仿或無(wú)水乙醇)。異硫氰酸酯的濃度應(yīng)為2-3倍CY3染料的濃度。
反應(yīng)條件:在冷藏條件下(通常在0-4°C之間),將異硫氰酸酯加入CY3染料溶液中。反應(yīng)時(shí)間可以根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整,通常為2-4小時(shí)。此反應(yīng)時(shí)間確保異硫氰酸酯基團(tuán)與CY3染料發(fā)生反應(yīng)。
反應(yīng)監(jiān)控:使用紫外-可見光光譜(UV-Vis)或高效液相色譜(HPLC)監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程,以確保異硫氰酸酯與CY3的反應(yīng)完成。可以觀察CY3染料的吸收峰的變化來(lái)確認(rèn)反應(yīng)是否成功。
3. 反應(yīng)后處理
去除溶劑和未反應(yīng)物:反應(yīng)完成后,可以使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(rotary evaporator)或透析去除反應(yīng)體系中的溶劑和未反應(yīng)的試劑。對(duì)于水溶性產(chǎn)物,透析是一種常見的清除方法;對(duì)于有機(jī)溶劑溶解的產(chǎn)物,可以通過(guò)反相色譜或凝膠滲透色譜進(jìn)行純化。
沉淀和干燥:根據(jù)需要,可以將反應(yīng)產(chǎn)物在低溫下沉淀出來(lái),然后用適當(dāng)?shù)娜軇ㄈ缫掖蓟蛞宜嵋阴ィ┣逑矗コ捶磻?yīng)的物質(zhì)。干燥產(chǎn)物以獲得最終的CY3-Isothiocyanate。
純化:可以通過(guò)反相高效液相色譜(HPLC)進(jìn)一步純化反應(yīng)產(chǎn)物,確保獲得高純度的CY3-異硫氰酸酯。純化時(shí)可以選擇適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相和梯度條件,以分離純化產(chǎn)物。
產(chǎn)品名稱:CY3-Isothiocyanate,CY3-ITC,CY3-異硫氰酸酯
純度:95%+
性狀:基于不同的分子量,呈白色 / 類白色固體,或液體。
溶劑:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常規(guī)有機(jī)溶劑。
儲(chǔ)藏條件:-20°C干燥避光保存
包裝規(guī)格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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僅供科研,不能用于人體實(shí)驗(yàn)AXC.2025.03.04
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