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廈門海葒興儀器股份有限公司
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有機磷或氨基甲酸酯類農藥對乙酰酯酶的活性具有抑制作用，通過測定該酶的活性被抑制的程度即可知樣品中含有農藥的殘留情況。計算公式：抑制率(%)=(ΔA0-ΔAi)/ ΔA0×99%
檢測對象：糧食、蔬菜、水果、肉、蛋、奶、水產品等
檢測原理：有機磷或氨基甲酸酯類農藥對乙酰酯酶的活性具有抑制作用，通過測定該酶的活性被抑制的程度即可知樣品中含有農藥的殘留情況。計算公式：抑制率(%)=(ΔA0-ΔAi)/ ΔA0×99%
試劑配制
① 緩沖液：將緩沖液試劑袋中的試劑倒出，溶于500ml 蒸餾水中，溶解、混勻即可。
② 底物：按需添加的底物量，向標有“底物"的試劑瓶中加入蒸餾水溶解、混勻即可。0~5℃環境下冷藏保存。
底物添加量為20ul時，應往標注為底物的瓶中加入2.7ml蒸餾水；
底物添加量為100ul時，應往標注為底物的瓶中加入13ml蒸餾水。
③ 顯色劑：無需配制放入冰箱冷藏（0~5℃），切勿冷凍結冰。
④ 酶試劑：酶試劑已配成溶液可直接使用。平常要在0~5℃環境條件下冷藏保存，切勿冷凍至結冰！！！
操作步驟
1.樣品前處理：
(1)
①植株：稱取2g樣品（葉菜剪成寬度為1厘米的菜樣，塊根菜取1厘米左右的表皮樣品）放入三角瓶中，加入10ml緩沖液后，振蕩提取2分鐘；
②茶葉：稱取0.5g茶葉樣品，加入5ml丙酮，振蕩提取5分鐘；取0.2ml上述丙酮溶液，40~50℃水浴蒸干；加入2.5ml緩沖液，振蕩2分鐘；（自備丙酮）
(2) 若浸提液清澈無色或顏色較淺，取上清液待測；
若浸提液混濁，離心，取上清液待測；
若浸提液色素干擾嚴重，可用活性炭脫色，具體方法如下：
將浸提液轉移至另一個三角瓶中，加入0.1~0.5g活性碳(根據顏色深淺調整)，水浴70℃加熱5分鐘，取出趁熱過濾，濾液待測。
[備注]：蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中含有對酶有影響的植物次生物質，容易產生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株（體）浸提，避免次生物物質干擾。
2.檢測樣品的制備：
(1) 空白對照液:
①取酶100ul，緩沖液2.5ml，加入專用反應瓶中，混勻靜置10分鐘后，再加入顯色劑100ul。
②加入底物20ul（或100ul）。
③搖勻后立即測試。
(2) 檢測樣品液:
①取酶100ul，待測樣品液2.5ml，加入專用反應瓶中，混勻靜置10分鐘后，再加入顯色劑100ul。
②加入底物20ul（或100ul）。
③搖勻后立即測試。
3 檢測樣品測試：
(1) 空白對照測量：
① 取2.5ml對照樣品于比色皿中；
② 將比色皿放入的通道中；
③ 按“對照"鍵，屏幕下方顯示測量時間；
④ 檢測結束后，儀器自動顯示對照樣品的測試結果△A0。
[備注]：a 當空白對照值在0.15-0.3之間時，可繼續做實驗；
b 當空白對照值在＜0.15時，需重做空白對照，若重復多次的空白對照值＜0.15時，必須更換酶試劑。
c 當空白對照值在＞0.3時，要調試減少儀器的測量時間，重新做空白對照。
(2) 樣品測量：
① 取2.5ml待測樣品于比色皿中；
② 將比色皿放入的通道中；
③ 按“樣品"鍵，屏幕下方顯示測量時間；
④ 檢測結束后，儀器自動顯示通道檢測樣品的測試結果△Ai。
判斷標準
(1) 樣品的抑制率在40~50%之間為可疑農殘超標樣品；
(2) 抑制率＞50%為農殘超標樣品，表明被測樣品的農藥殘留毒性可能超過安全的界定標準，建議用氣相色譜等儀器分析法作進一步確認。
注意事項
① 加入底物后，應迅速混勻，立即測試。
② 測試前根據需添加底物的量對底物進行稀釋。
③ 所用的檢測液對皮膚均具有不同程度的傷害，使用時請做好防護。不慎沾到皮膚應立即擦干并用大量水沖洗。
檢測試劑請務必在2~4℃冰箱保存。
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