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注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體 34mL×1 瓶,4℃保存。每次用完用封口膜密封保存。
試劑二:液體 30mL×1 瓶,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,50mg 木質(zhì)素,4℃保存。臨用前加入 1mL 高氯酸,充分混勻溶解,配成50mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說明:
木質(zhì)素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的成分之一,具有使細(xì)胞相連的作用。木質(zhì)素存在于木質(zhì)組織中,主要作用是通過形成交織網(wǎng)來硬化細(xì)胞壁,為次生壁主要成分。
木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙酰化后在 280nm 處有特征吸收峰,280nm 的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關(guān)。
試驗中所需的儀器和試劑:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP 管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣品處理:樣品 80℃烘干至恒重,粉碎,過 40 目篩,稱取約 3mg 于 1.5mLEP 管中。二、測定步驟:
1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 280nm,冰乙酸調(diào)零。
2、操作表:在 1.5ml玻璃管中依次加入下列試劑:
| 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣品(mg) | 3 | - | - |
試劑一(µL) | 300 | 300 | 300 |
高氯酸(µL) | 12 | - | 12 |
標(biāo)準(zhǔn)液(µL) | - | 12 | - |
封口膜密封,充分混勻。于 80℃水浴鍋水浴 40min,進(jìn)行乙酰化。每隔 10min 震蕩一次, 然后自然冷卻。 | |||
試劑二(µL) | 300 | 300 | 300 |
充分混勻后于常溫 8000g 離心 10min,取上清。 | |||
上清液(µL) | 12 | 12 | 12 |
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三、木質(zhì)素含量計算:
C 標(biāo)準(zhǔn)=C 原液×V 標(biāo)準(zhǔn)÷V 乙酰化×V 上清÷V 檢測=0.0196 mg/mL
木質(zhì)素(mg/g)= △A÷(△A 標(biāo)準(zhǔn)÷C 標(biāo)準(zhǔn))×V 檢測÷(W×V 上清÷V 乙酰化)
= 0.5998×△A÷△A 標(biāo)準(zhǔn)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)液在最終檢測體系中的濃度,0.0196 mg/mL;C 原液:標(biāo)準(zhǔn)液濃度,50mg/mL;V 標(biāo)準(zhǔn):加入的標(biāo)準(zhǔn)液的體積,0.012mL;V 乙酰化:乙酰化反應(yīng)體積,0.612mL;V 上清:上清液體積,0.012mL;V 檢測:檢測反應(yīng)總體積,0.6mL;W:樣本質(zhì)量,g。1、試劑一有毒性,請操作時
注意事項:
1、做好防護(hù)措施,加熱前必須用封口膜密封,以防氣體溢出。
2、加熱過程中有劇烈反應(yīng),震蕩時輕搖,以免壓力過大噴出造成人身傷害。
3、冰乙酸具有強刺激性,建議操作過程全部在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。
4、取上清加冰乙酸步驟根據(jù)自己樣品乙酰化程度,冰乙酸的用量可調(diào)整,保證吸光值在 0.1-0.8 之間即可,并在公式中參與計算。
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