土壤堿性磷酸酶（S-AKP/ALP）檢測試劑盒注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷化合物礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉化及其生物有效性，是評價土壤磷素生物轉化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 顯著影響。通常按照其最適 pH 范圍，分為堿性、中性和酸性三種類型磷酸酶。

測定原理：

堿性環境中，S-AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過測定酚的生成量即可計算出S-AKP/ALP 活性。

土壤堿性磷酸酶（S-AKP/ALP）檢測試劑盒自備實驗用品及儀器：

可見光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺式離心機、37℃恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水、無水乙醇和甲苯。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。用前加 100mL 蒸餾水充分溶解。試劑三：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加 576μ  L 無水乙醇（自備），24μ  L 蒸餾水充分溶解。（變褐色后不能再使用）

標準品：液體×1 支，0.5μ mol/mL 苯酚標準液，4℃保存。

催化反應：

稱取風干混勻土壤約 0.1g，加入 50μ L 甲苯（自備），輕搖 15min；加 400μ L 試劑一并且搖勻后，置于 37℃恒溫培養箱，開始計時，催化反應 24h；到時后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應。8000g，25℃離心 10min，取上清液置于冰上待測。

土壤堿性磷酸酶（S-AKP/ALP）檢測試劑盒顯色反應：

1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min，調節波長到 660 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取微量玻璃比色皿/酶標板，加入 10μ L 蒸餾水，20μ L 試劑三，4μ L 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 166μ L，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為 A 空白管。

3. 標準管：微量玻璃比色皿/酶標板，加入 10μ L 標準液，20μ L 試劑三，4μ L 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 166μ L，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為 A 標準管。

4. 測定管：微量玻璃比色皿/酶標板，加入 10μ L 上清液，20μ L 試劑三，4μ L 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 166μ L，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660 nm 測定吸光度，記為 A 測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。