土壤中性磷酸酶（S-NP）檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)，注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

土壤磷酸酶是催化土壤有機(jī)磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 的顯著影響，根據(jù)最適 PH 范圍，一般把土壤磷酸酶分為中性、酸性和堿性三種類(lèi)型。

測(cè)定原理：

中性環(huán)境中，S-NP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過(guò)測(cè)定酚的生成量即可計(jì)算出 NP 活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

土壤中性磷酸酶（S-NP）檢測(cè)試劑盒試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。用前加 100mL 蒸餾水充分溶解。試劑三：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加 576μ  L 無(wú)水乙醇（自備），24μ  L 蒸餾水充分溶解。（變褐色后不能再使用）

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支，0.5 μ mol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

催化反應(yīng)：

稱(chēng)取風(fēng)干混勻土壤約 0.1g，加入 50μ L 甲苯（自備），輕搖 15min；加 400μ L 試劑一并且搖勻后，置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱，開(kāi)始計(jì)時(shí)，催化反應(yīng) 24h；到時(shí)后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應(yīng)。8000g，25℃離心 10min，取上清液置于冰上待測(cè)。

土壤中性磷酸酶（S-NP）檢測(cè)試劑盒顯色反應(yīng)：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板，加入 10μ L 蒸餾水，20μ L 試劑三，4μ L 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 166μ L，混勻后 25℃靜置 30min，于 660nm 測(cè)定吸光度，記為 A 空白管。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板，加入 10μ L 標(biāo)準(zhǔn)液，20μ L 試劑三，4μ L 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 166μ L，混勻后 25℃靜置 30 min，于 660nm 測(cè)定吸光度，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 測(cè)定管：取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板，加入 10μ L 上清液，20μ L 試劑三，4μ L 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水 166μ L，混勻后室溫 25℃30 min，于 660nm 測(cè)定吸光度，記為 A 測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。