土壤總磷/有機(jī)磷/無機(jī)磷試劑盒-分光光度法注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

規(guī)格: 50T/48S

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋 10  倍后再用。

試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 20 mL 蒸餾水，充分溶解后加入 10 mL

試劑二，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支，40 μg/ml  無機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存。

土壤總磷/有機(jī)磷/無機(jī)磷試劑盒-分光光度法產(chǎn)品說明：

土壤總磷包括有機(jī)磷和無機(jī)磷，其中無機(jī)磷能夠直接被植物利用。土壤有機(jī)磷經(jīng)過礦化分解而轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷。同時測定土壤總磷、有機(jī)磷和無機(jī)磷，可以全面反映土壤磷營養(yǎng)狀況。

利用鉬藍(lán)法定磷。取一份土樣，通過浸提法測定土壤無機(jī)磷含量；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼燒后，土壤有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷，測得土壤總磷含量；總磷含量減去無機(jī)磷含量，即可計算出有機(jī)磷含量。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機(jī)、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐，

1mL 玻璃比色皿、蒸餾水、100 目篩子（可更小）。

土壤總磷/有機(jī)磷/無機(jī)磷試劑盒-分光光度法操作步驟：

一、土壤不同形態(tài)磷提取：

1、無機(jī)磷：稱取通過 100  目篩子的風(fēng)干土樣 0.1g，轉(zhuǎn)移到 10mL 離心管，加入 10mL 試劑一， 震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃離心 10min，取上清液一，用于無機(jī)磷含量測定。

2、總磷提取：取通過 100 目篩子的風(fēng)干土樣，550℃灼燒 1h，冷卻后稱取約 0.1g，轉(zhuǎn)移到 10 mL 離心管，加入 10mL 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃，離心 10min， 取上清液二，用于總磷含量測定。

二、測定步驟：

1.分光光度計預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2.打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。

3.空白管：取 EP 管，依次加入 500μL 蒸餾水，500μL 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min， 室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為 A 空白管。

4.標(biāo)準(zhǔn)管：取 EP 管，依次加入 50μL 標(biāo)準(zhǔn)液，450μL 蒸餾水，500μL 試劑三，混勻后置于 40℃

水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

5.測定管：取 EP 管，依次加入 50μL 上清液一或者上清液二，450μL 蒸餾水，500μL 試劑三， 混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10   min 后于 660   nm  測定吸光度，記為 A 測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

土壤總磷/有機(jī)磷/無機(jī)磷試劑盒-分光光度法三、土壤磷含量計算：

1.土壤無機(jī)磷含量（μg /g）=[C  標(biāo)準(zhǔn)液×(A  測定管－A  空白管)÷(A  標(biāo)準(zhǔn)管－A  空白管)]×V 總÷W

=400×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：40μg/ml；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V 總：上清液一總體積，10 mL。

2.土壤總磷含量（μg /g）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總

÷W=400×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：40μg/ml；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V 總：上清液二總體積，10 mL。

3.土壤有機(jī)磷（μg /g）=土壤總磷-土壤無機(jī)磷

注意事項：

試劑三配制過程中，可能會產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時不要將黑色固體吸入。