植物可溶性糖（s-sugar）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書

本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測(cè)定植物組織、細(xì)胞及相

關(guān)液體樣本中可溶性糖（s

-

sugar）的含量。

實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中植物可溶性糖（s

-

sugar）水平。用純化的植物

可溶性糖（s

-

sugar）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入植物

可溶性糖（s

-

sugar），再與 HRP 標(biāo)記的檢測(cè)抗體結(jié)合，形成抗體

-

抗原

-

酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)

過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成

終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物可溶性糖（s

-

sugar）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm

波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中植物可溶性糖（s

-

sugar）含量。

試劑盒組成：

試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存

說(shuō)明書 1 份 1 份

封板膜 2 片 2 片

密封袋 1 個(gè) 1 個(gè)

酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2

-

8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品 0.3ml×6 管 0.3ml×6 管 2

-

8℃保存

酶標(biāo)試劑 5 ml×1 瓶 10 ml×1 瓶 2

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8℃保存

樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2

-

8℃保存

顯色劑 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2

-

8℃保存

顯色劑 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2

-

8℃保存

終止液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2

-

8℃保存

20×濃縮洗滌液 15ml×1 瓶 25ml×1 瓶 2

-

8℃保存

注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：400、200、100、50、25、0 μg/mL.

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固 10

-

20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000

-

3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集

上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10

-

20 分鐘后，離心

20 分鐘左右（2000

-

3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次

離心。

3.

尿液：用無(wú)菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000

-

3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程

中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4.

細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000

-

3000 轉(zhuǎn)

/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用 PBS（PH7.2

-

7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞2

濃度達(dá)到 100 萬(wàn)/ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分

鐘左右（2000

-

3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入

一

定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?

用。標(biāo)本融化后仍然保持 2

-

8℃的溫度。加入

一

定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將

標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000

-

3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后

一

份待檢

測(cè)，其余冷凍備用。

6.

標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上

進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于

-

20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

.

7.

不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.

標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；。

2.

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣

品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl

（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃

動(dòng)混勻。

3.

加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 100μl，空白孔除外。

4.

溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。

5.

配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。

6.

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復(fù) 5 次，拍干。

7. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯

色 15 分鐘

.

8.

終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

9.

測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液

后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

注意事項(xiàng)：

1．

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15

-

30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2． 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．

各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。

一

次加樣時(shí)間hao

控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．

請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，hao做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD 值

大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第

一

孔的 OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋

一

定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)

算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．

封板膜只限

一

次性使用，以避免交叉污染。

6．

底物請(qǐng)避光保存。

7．

嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)

.

8．

所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．

本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

10.

如與英文說(shuō)明書有異，以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。