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智立中特(武漢)生物科技有限公司
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H4人神經膠質瘤細胞
種屬:人
別稱:H-4
組織來源:腦組織
疾病神經膠質瘤
傳代比例/細胞消化1:2傳代,消化1-2分鐘
完quan培養基配置DMEM培養基;10%胎牛血清;1%雙抗
簡介該細胞源自一位37歲神經膠質瘤白人男性患者
形態上皮細胞樣
生長特征貼壁生長
倍增時間每周2至3次
STR
Amelogenin:X,Y CSF1PO:10,12 D13S317:12 D16S539:11,12 D5S818:10,12 D7S820:8,11 THO1:7,9
TPOX:8,11 vWA:14,18
培養條件氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
凍存條件凍存液:90%FBS,DMSO 10%,
保藏機構ATCC;HTB-148
產品使用僅xian于科學研究,不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。
H4人神經膠質瘤細胞傳代操作步驟:
一、貼壁細胞傳代
1.提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內。
2.吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞。
3.加入適量胰mei,使胰mei的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰mei,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止胰nei作用。
4.H4人神經膠質瘤細胞用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡。
5.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。
二、懸浮細胞傳代
1.將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min。
2.棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液。
3.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。
H4人神經膠質瘤細胞培養的過程中,經常見到黑色的顆粒或小黑點,這種情況是怎么引起的呢?該怎么避免呢?原因:
黑點,大概有細胞本身帶的,環境有的,還有人身上帶進細胞間的,還有就是血清和培養基
1、如果小黑點有增殖趨勢,那么就有可能是污染了,需要處理;
2、如果小黑點沒有增殖趨勢,且不影響細胞生長,也不影響實驗的話,則可能
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a、是“黑膠蟲",黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物,本身就存在爭議。有人認為是從血清中來的一種原蟲,也有人認為是細菌,或是真菌,也有人認為是血清中的蛋白的結晶。“黑膠蟲"可寄生于動物細胞,也可以生存于培養基中,依靠H4人神經膠質瘤細胞和培養基中的營養為生,并隨細胞傳代而傳代。“黑膠蟲"與細胞競爭性生長,開始時對細胞并沒有什么影響,但當黑膠蟲的數量多到一定程度的時候,細胞生長就會受到影響直至死亡,嚴重影響了科研活動的開展和進行。以前(這個至少是10年以前),很多實驗室在養細胞時用國產血清,那時的血清可能質量不過關,有所謂的“黑膠蟲",但是也沒有明確的鑒定。但是現在的血清,即使國產的,產品里這種現象就少見了。
b、是細胞碎片,或血清里德沉淀析出,在做布朗運動。
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